- 马胜男;王倩倩;申家兴;丁鹏云;冯一鸣;苑丽;潘玉善;胡功政;贺丹丹;
养殖场中抗菌药的长期使用促使耐药菌株快速出现和传播，并可以通过粪肥和污水向环境排放，给公共卫生带来巨大威胁。为了调查猪场环境源大肠杆菌的耐药情况，评估耐药基因的传播风险，本试验采集163份猪场粪便、污水和土壤样本，通过平板划线分离培养法分离大肠杆菌，通过药敏试验检测分离菌株对14种抗菌药物的耐药情况，聚合酶链式反应(PCR)检测临床重要耐药基因，脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测菌株间的亲缘关系，接合试验和质粒复制子分型检测接合子的质粒类型。结果显示，共分离获得150株大肠杆菌，其中粪便源大肠杆菌耐药情况最严重，污水源大肠杆菌次之，土壤源大肠杆菌最低；污水源大肠杆菌耐药基因检出种类最多，粪便源大肠杆菌次之，土壤源大肠杆菌最少。10株携带黏菌素耐药基因mcr-1大肠杆菌和18株携带替加环素耐药基因tet(X4)大肠杆菌分离自粪便和污水样本，且多重耐药情况较为严重。10株携带mcr-1大肠杆菌经PFGE分为9种脉冲场图谱，其中9株与大肠杆菌C600接合成功，接合子中有IncFIA、IncW、IncFIB、IncI2和IncP五种质粒类型；18株携带tet(X4)大肠杆菌经PFGE分为15种脉冲场图谱，其中16株与大肠杆菌C600接合成功，接合子中有IncFIB、IncFrepB和IncHI1三种质粒类型。结果表明，必需持续监测猪场环境中的临床重要耐药基因，特别需要关注mcr-1和tet(X4)基因的流行情况，并且在养殖中合理使用黏菌素和四环素类抗生素。
2024年11期 v.60 1-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 1306K] [下载次数：435 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：4 ] - 陈永平;武珣;徐采琳;于权麟;孙子涵;王思爽;叶镇邦;陈世增;胡学远;刘焕奇;
为了探明右美托咪定(DEX)对异氟醚致幼龄大鼠海马损伤的保护作用及其机制，本试验选取60只SD幼龄大鼠随机均分为对照组、模型组、DEX干预组和DEX组。对照组未作处理，DEX干预组和DEX组大鼠分别腹腔注射25μg/(kg·bw) DEX;30 min后，模型组和DEX干预组大鼠持续灌注1.5%异氟醚，6 h后处死所有大鼠，分离海马组织，通过苏木素-伊红(H.E.)染色观察海马组织病理学变化，透射电子显微镜观察海马细胞超微结构，酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测海马组织中胱天蛋白酶3(Caspase-3)活性，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率，Western blot检测转化生长因子-β(TGF-β)蛋白表达，实时荧光定量PCR(qPCR)检测微小RNA 137(miR-137)表达。结果显示，与对照组相比，模型组大鼠海马神经元排列紊乱、细胞间隙增大，线粒体严重扭曲肿胀、嵴溶解消失，线粒体损伤评分极显著升高(P<0.01),Caspase-3活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和TGF-β蛋白表达量均极显著升高(P<0.01),miR-137表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比，DEX干预组大鼠海马神经元排列较整齐，仅见少量线粒体肿胀、嵴溶解消失，线粒体损伤评分极显著降低(P<0.01),Caspase-3活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和TGF-β蛋白表达量极显著降低(P<0.01),miR-137表达水平显著升高(P<0.05);DEX组与对照组相比，所有指标均差异不显著(P>0.05)。结果表明，DEX可改善异氟醚诱导的幼龄大鼠海马损伤，可能与其调控miR-137,抑制TGF-β表达，遏制细胞凋亡的发生有关。
2024年11期 v.60 11-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 1880K] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 常陈昊;张自强;陈晓光;吕琼霞;丁轲;刘玉梅;
为了研究白藜芦醇(Res)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的兔空肠氧化应激的保护作用，本试验取21只40日龄的健康肉兔，随机分为对照组(饲喂基础饲粮)、AFB1组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw) AFB1]和AFB1+Res组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw) AFB1+30 mg/(kg·bw) Res]。饲喂对应饲粮21 d后，采用苏木精-伊红(H.E.)染色和过碘酸雪夫氏(PAS)染色，观察空肠形态结构的改变；使用试剂盒检测空肠组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果显示，AFB1组兔空肠绒毛断裂，顶端溶解；与对照组相比，AFB1组绒毛高度极显著下降(P<0.01)而隐窝深度极显著上升(P<0.01),绒毛高度与隐窝深度的比率(V/C)极显著下降(P<0.01),杯状细胞数量和黏液层厚度均显著下降(P<0.05);与AFB1组相比，AFB1+Res组肠道绒毛结构恢复，绒毛高度极显著上升(P<0.01),隐窝深度极显著下降(P<0.01),V/C极显著上升(P<0.01),杯状细胞数量和黏液层厚度均显著上升(P<0.05);与对照组相比，AFB1组GSH-Px和SOD活性均极显著下降(P<0.01),T-AOC显著下降(P<0.05),MDA含量极显著上升(P<0.01);与AFB1组相比，AFB1+Res组GSH-Px和SOD活性均极显著上升(P<0.01),T-AOC显著上升(P<0.05),MDA含量极显著下降(P<0.01)。结果表明，在饲粮中添加30 mg/(kg·bw) Res可提高空肠抗氧化能力，缓解AFB1诱导的兔空肠结构损伤，为临床缓解AFB1中毒提供理论依据。
2024年11期 v.60 19-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 2124K] [下载次数：336 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李雅卓;颜亚松;王昊;孔令聪;马红霞;
为明确致犬严重呼吸道症状的病原菌及其病原特征，本试验采集患有严重呼吸道症状病死犬肺脏脓包样本，通过病原菌的分离纯化和形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序鉴定、生长曲线绘制对分离菌株进行种属鉴定；通过微量肉汤稀释法检测分离菌株的药物敏感性；通过溶血试验和小鼠感染试验检测分离菌株的致病性；通过全基因组测序分析分离菌株基因环境。结果显示，本试验分离菌株为支气管败血波氏杆菌，命名为Z2。药敏试验结果显示，分离菌株Z2对头孢曲松、头孢喹肟、链霉素和替米考星耐药，对恩诺沙星、多西环素和氟苯尼考等11种药物敏感。该分离菌株具有一定的溶血活性，对小鼠的半数致死量(LD_(50))为5.01×10~5CFU/mL。该分离菌株全基因组大小为5 257 583 bp,含有4 887个基因；仅携带3个耐药基因，介导其对磺胺类和氨基糖苷类药物耐药，但未检测到β-内酰胺类耐药基因；共有1 169个致病性相关基因，其中粘附性毒力基因最多，包括细胞间粘附蛋白、百日咳粘附素、菌毛、鞭毛和被膜等毒力基因。结果表明，分离菌株Z2具有较高的耐药性和致病性。本试验结果为支气管败血波氏杆菌的致病性研究提供了一定的参考价值。
2024年11期 v.60 24-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 2257K] [下载次数：375 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 向敏;刘辰晖;余婕;周源;胡修忠;夏永春;王定发;夏瑜;程蕾;
为确定湖北省某马头山羊养殖场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原及其分子生物学特征。本试验利用牛睾丸细胞对马头山羊唇部痂皮病料进行病毒分离培养，通过细胞病变观察、病毒滴度测定、PCR扩增和测序等方法对分离毒株进行了鉴定。并采用MegAlign、MEGA 7.0、DNAMAN和Bioedit等软件分析了分离毒株和China Vaccine毒株B2L基因的核苷酸序列相似性，并预测了蛋白二级结构和疏水性。结果显示，接种病料上清液的牛睾丸细胞盲传5代后出现细胞病变，经PCR扩增的分离毒株B2L基因大小为1 137 bp;所分离羊口疮病毒(ORFV)病毒滴度可达10~(5.5) TCID_(50)/mL;分离毒株与AH1404、FJ-YX和GX-BH毒株B2L基因同源性为99.3%;与China Vaccine毒株同源性为89.5%。分离毒株与China Vaccine毒株B2L基因序列分析显示处在不同分支，两者存在8个位点突变(aa11、aa80、aa101、aa123、aa126、aa294、aa327和aa333);B2L蛋白为稳定的疏水性蛋白；分离毒株和China Vaccine毒株的蛋白二级结构存在差异。结果表明，该养殖场ORFV的B2L基因出现变异，有关部门应当加强对ORFV流行情况的监测。
2024年11期 v.60 32-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 2340K] [下载次数：179 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 冀亚路;姜秋杰;袭恒豫;张昊;毕斓婷;牛伟;付殿国;孙长江;冯新;顾敬敏;韩文瑜;
为了解吉林省不同地区规模化生猪养殖场金黄色葡萄球菌和肠球菌的耐药情况，本试验对采自吉林省7个市(县)共20个规模化生猪养殖场的断奶仔猪粪便样本(420份)进行了金黄色葡萄球菌和肠球菌的分离鉴定和药物敏感性测定。结果显示，共分离到96株金黄色葡萄球菌和224株肠球菌，分离率分别为22.86%和53.33%。20种抗菌药物敏感性测定结果显示，猪源金黄色葡萄球菌对红霉素和四环素耐药最严重，耐药率均达到95.65%,对磷霉素敏感；猪源肠球菌对红霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑、四环素、头孢他啶、多西环素和多黏菌素表现出高耐药率，耐药率均在90.00%以上，对磷霉素耐药率最低，仅为3.13%。多重耐药种数统计结果显示，金黄色葡萄球菌分离株至少耐3种抗菌药物，多重耐药种数在3～16种均有分布；肠球菌分离株至少耐5种抗菌药物，多重耐药种数在5～17种均有分布。结果表明，吉林省规模化猪场金黄色葡萄球菌和肠球菌均存在严重的多药耐药性，为吉林省金黄色葡萄球菌和肠球菌耐药情况和临床合理用药提供了参考依据。
2024年11期 v.60 40-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 1121K] [下载次数：425 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李力;白艺伟;熊霙;刘博洋;
为了解全球牛结节性皮肤病(LSD)的流行特征，对其针对性防控提供参考，本试验从世界动物卫生组织(WOAH)和联合国粮食及农业组织(FAO)获取2006—2023年全球LSD官方报告疫情数据。通过季节性趋势分析的方法分析LSD流行的季节性趋势，通过基于标准差椭圆的方向分布分析揭示LSD的传播方向趋势，通过基于时空扫描统计量的时空聚集性分析得出LSD的时空聚集区。季节性趋势分析结果显示，LSD的流行具有明显的季节性，春夏为流行高峰期，秋冬则通常不易发生。方向分布分析结果显示，LSD在4个流行阶段中具有不完全相同的传播方向，第1阶段(2006—2014年)和第2阶段(2015—2017年)的LSD疫情呈现西南-东北方向的传播；第3阶段(2018—2020年)的LSD疫情呈现西北-东南方向的传播；第4阶段(2021—2023年)的LSD疫情呈现西南-东北方向的传播；在研究时段内LSD疫情的潜在传播路径为从非洲到欧洲再到亚洲；LSD传播范围逐渐扩大，主要流行区域从非洲、欧洲逐渐向亚洲东南部转移。时空聚集性分析共得到研究时段内9个具有统计学意义的时空聚集区，其中6个分布于我国及周边国家，提示了我国LSD防控工作的必要性。本试验通过多种分析方法综合分析了2006—2023年全球LSD疫情的流行特征，揭示了LSD在不同季节的流行规律、传播方向趋势和时空聚集区的分布情况，为未来预测LSD的流行趋势提供了重要依据，为制定针对性的防控策略和国际合作提供了科学支持。
2024年11期 v.60 46-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 1797K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：4 ] - 彭嘉安;陈智;郑姣妹;赖诗嘉;廖书漪;李本睿;邹建曾;陈念;唐巍;李真诚;陈胜规;张崇嘉;袁晓宇;王洪亮;
为掌握我国湖南省长沙市城区犬狂犬病免疫情况，分析影响免疫抗体合格率的风险因素，本试验使用狂犬病病毒酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒，对2020—2022年采集的3 291份犬血液样品进行抗体滴度检测，并对长沙市犬狂犬病监测点数量和分布情况以及犬只养殖类型、性别、年龄、免疫次数、免疫后采样间隔时间和疫苗种类进行分析。结果显示，长沙市3年监测覆盖面持续扩大，但监测区域主要覆盖人口密集的城区，未覆盖农村地区。2020—2022年长沙市城区犬狂犬病免疫抗体年平均合格率由70.21%上升至89.76%,再下降至74.85%,即总体呈先上升再下降的趋势。不同地区比较，芙蓉区(86.14%)、雨花区(82.98%)和长沙县(80.70%)3年免疫抗体平均合格率较高，宁乡市(65.63%)最低。不同犬只养殖类型、年龄、免疫次数和免疫后采样间隔时间对免疫抗体合格率的影响差异显著(P<0.05);而性别和疫苗种类对免疫抗体合格率的影响差异不显著(P>0.05)。本试验为长沙市狂犬病的综合防控提供了数据支持。
2024年11期 v.60 54-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 1718K] [下载次数：180 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 胡秀花;王子华;黄鹏成;刘园园;毛君杰;王桂琴;马翀;王少林;
为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性，本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测，并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示，检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致，均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等；检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高，均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等；药物敏感性试验结果显示，检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高；奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述，该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率，可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持，从而降低抗菌药物的使用量，以减少牧场经济损失。
2024年11期 v.60 61-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 2117K] [下载次数：282 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 刘文晓;张坤;程晶;李永清;
为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法，本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体，以其作为检测原，优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条，验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性，并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示，共制备7株针对IBRV的单克隆抗体，其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体，建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应，检测限为4.04×10~4TCID_(50)/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示，2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明，本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好，为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。
2024年11期 v.60 70-76页 [查看摘要][在线阅读][下载 1476K] [下载次数：324 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 仉伟;刘青;朱云芸;赵学乾;滕丽好;王启峰;周继生;李伟;张成林;
为了解野生动物馆舍环境中细菌的多样性及潜在致病菌对消毒剂的敏感性，本试验选取济南动物园大象馆、猛兽馆和金丝猴馆3种哺乳动物馆舍作为研究对象，分别于冬、夏两季采集馆舍中的环境样本，利用Illumina高通量测序技术，比较不同季节动物馆舍环境中的细菌多样性，并分离环境中的潜在致病菌，采用微量肉汤稀释法测定潜在致病菌对过硫酸氢钾复合物粉、二氯异氰尿酸钠粉、过氧乙酸溶液和戊二醛癸甲溴铵溶液的敏感性。结果显示，野生动物馆舍环境中的细菌Alpha多样性指数存在明显的季节性差异，Richness、Shannon、Chao1和Equitability四种指数冬季极显著高于夏季(P<0.01),Dominance指数冬季显著高于夏季(P<0.05),Simpson指数冬季显著低于夏季(P<0.05)。在群落组成方面，馆舍环境中的细菌主要由变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)4个门组成，约占97%。从3种哺乳动物馆舍分离到不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、埃希氏-志贺菌属(Escherichia/Shigella)和链球菌属(Streptococcus)共5个属40株潜在致病菌，本试验条件下4种消毒剂对潜在致病菌的最低抑菌浓度(MIC)值均不高于厂家推荐的环境消毒使用浓度。本试验初步摸清了野生动物馆舍的环境细菌分布特征，以及潜在致病菌对消毒剂的敏感性，为改善笼舍环境卫生以及规范野生动物饲养管理提供参考依据。
2024年11期 v.60 77-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 1690K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]