- 李雪瑜;柳加洋;葛津利;刘洪涛;邱家章;
为探究5-羟基-四氢萘酮对沙门菌毒力岛-1(SPI-1)及其III型分泌系统（T3SS-1）功能的抑制作用和机制，本试验通过药代动力学和毒性预测、生长曲线测定、细胞入侵试验、免疫荧光成像、效应蛋白分泌和表达检测、细菌运动能力评估、入侵位点细胞膜褶皱观察、实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）、细胞毒性和细胞保护试验，并结合小鼠感染模型，系统评价5-羟基-四氢萘酮对鼠伤寒沙门菌的体内外抗毒力活性及其分子机制。结果显示，预测5-羟基-四氢萘酮具有良好的成药性；与对照组（0μg/mL）相比，64μg/mL 5-羟基-四氢萘酮对鼠伤寒沙门菌生长速度无显著影响（P > 0.05）;16和4μg/mL5-羟基-四氢萘酮分别显著抑制鼠伤寒沙门菌对人宫颈癌细胞系HeLa(P<0.01)和人结肠癌细胞系Caco-2(P<0.05)的入侵；8μg/mL 5-羟基-四氢萘酮显著抑制鼠伤寒沙门菌效应蛋白SipA和SipB的分泌（P<0.05）;16和32μg/mL 5-羟基-四氢萘酮分别显著抑制SipA和HilA蛋白相对表达量（P<0.05）;64和32μg/mL 5-羟基-四氢萘酮分别显著抑制鼠伤寒沙门菌的泳动（P<0.05）和群集运动能力（P<0.01）,32μg/mL 5-羟基-四氢萘酮极其显著降低鼠伤寒沙门菌诱导宿主细胞膜褶皱的能力（P<0.001），并极显著下调SPI-1相关转录因子及下游基因的转录（P<0.01或P<0.001）;64μg/mL 5-羟基-四氢萘酮对HeLa细胞无明显毒性（P > 0.05）,32μg/mL 5-羟基-四氢萘酮极其显著提高受感染细胞保护率（P<0.001）；与模型组相比，5-羟基-四氢萘酮治疗组小鼠盲肠、肝脏和脾脏细菌载量均显著降低（P<0.05或P<0.01），炎性病理损伤明显改善。结果表明，5-羟基-四氢萘酮可作为一种高效的鼠伤寒沙门菌T3SS-1抑制剂，为针对鼠伤寒沙门菌抗毒力药物的开发提供了机制较为明确的先导化合物。
2026年04期 v.62 1-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 3959K] [下载次数：18 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：21 ] - 姜小寒;王海伟;李鑫;
为了利用反向遗传技术构建表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的重组脑心肌炎病毒（rEMCV-EGFP），并探究其生物学特性，本试验通过融合聚合酶链式反应（PCR）构建表达EGFP的重组质粒pCI-EMCV-EGFP，将该重组质粒转染幼年叙利亚仓鼠肾细胞-21(BHK-21)细胞，获得重组荧光病毒rEMCV-EGFP。利用EMCV 2C蛋白多抗，通过间接免疫荧光（IFA）和蛋白免疫印迹（WB）对rEMCV-EGFP进行鉴定，并通过生长曲线测定、蚀斑试验和遗传稳定性试验进一步分析其生物学特性。经测序验证，成功构建重组质粒pCI-EMCV-EGFP;rEMCV-EGFP成功表达EGFP;rEMCV-EGFP感染后36 h才出现典型细胞病变，与EMCV野生毒株和rEMCV相比延迟约6 h。IFA和WB鉴定结果显示，rEMCV-EGFP能够在表达EGFP的同时正常表达EMCV 2C蛋白。生长曲线测定和蚀斑试验结果显示，与EMCV野生毒株和rEMCV相比，rEMCV-EGFP感染后各时间点病毒滴度均显著降低（P<0.000 1或P<0.001或P<0.01或P<0.05）；蚀斑直径和数量均极其显著减少（P<0.000 1）。遗传稳定性试验结果显示，rEMCV-EGFP连续传代6次均能成功表达EGFP，且通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术可稳定检测到EGFP基因。结果表明，本试验利用反向遗传技术成功构建重组荧光病毒rEMCV-EGFP，为EMCV致病机制的研究、组织嗜性分析、抗病毒药物筛选和新型疫苗开发提供了关键平台。
2026年04期 v.62 12-19页 [查看摘要][在线阅读][下载 2250K] [下载次数：35 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：13 ] - 谢建华;蒋佳利;骆璐;张超;苗清新;凌洪权;陈忠琼;蔺露;丁平;黄诚;刘玉良;曾政;
为了给狂犬病实验室核酸检测提供标准化质控品，提升检测结果的准确性，本试验将狂犬病病毒（RABV）核蛋白（N）基因序列克隆至慢病毒表达载体pGWLV-pseudovirus，构建重组真核表达质粒，与慢病毒辅助质粒共转染至人胚肾293T细胞，制备RABV N基因假病毒；对RABV N基因假病毒进行灭活验证、PCR验证和质粒残留检测，以及特异性和稳定性评估。结果显示，本试验构建的重组真核表达质粒大小为8 961 bp，与预期大小相符；镜检可见假病毒已成功制备，病毒颗粒在灭活前后形态结构均完整。灭活后假病毒检测结果显示，其中慢病毒滴度为0 TU/mL，安全性高；呈RABV核酸阳性且无质粒残留；不与犬副流感病毒、犬腺病毒2型、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒、犬疱疹病毒和支原体发生交叉反应，特异性高；可在-20℃环境条件下稳定保存36个月，稳定性强。结果表明，本试验获得了稳定性强、质量合格的RABV N基因假病毒，可用于狂犬病实验室核酸检测全过程的质控。
2026年04期 v.62 20-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 2606K] [下载次数：23 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：17 ] - 陈晓洁;王钢;耿尚景超;黎明;郑侃;杨延丽;肖燕;贺笋;
为了建立产气荚膜梭菌重组α毒素（rCPA）蛋白的高效液相尺寸排阻色谱（HPSEC）定量方法，并评价其在疫苗工艺开发中的应用范围，本试验通过HPSEC、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blot）鉴定rCPA蛋白标准品及其色谱峰；筛选HPSEC色谱柱型号，优化流动相pH、盐浓度和检测流速；建立HPSEC检测rCPA蛋白的标准曲线，系统验证该方法的专属性、检测限、准确度、日内精密度和日间精密度，并评估该方法在rCPA蛋白细菌培养上清样品、浓缩样品和灭活样品中检测rCPA蛋白的适用性。结果显示，SDS-PAGE检测rCPA蛋白标准品纯度> 90%,HPSEC纯度> 95%;Zenix SEC-150色谱柱具有最优分离度、对称性和色谱峰面积；最优流动相为p H 6.8含有100 mmol/L NaCl的125 mmol/L磷酸盐缓冲液；最优流速为0.6 mL/min。HPSEC具有专属性和良好的线性（R~2=0.999 98）；检测限在4.9μg/mL以下；HPSEC检测高、中、低3个浓度的r CPA蛋白标准品准确度介于96.2%～99.5%，准确度较高；日内和日间精密度良好，相对标准偏差均<5%；该方法适用于细菌培养上清中r CPA蛋白浓度的实时监测，以及浓缩样品和灭活样品中r CPA蛋白浓度的测定。结果表明，本试验所建立HPSEC定量方法适用性好、重复性好、准确度高，能应用于r CPA蛋白生产不同阶段样品的质量控制，指导疫苗工艺开发。
2026年04期 v.62 27-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 2128K] [下载次数：23 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 马文阁;戴海越;吴浩;刘宇昕;于越洋;王爽;孙玮玮;吴文学;
为快速、高效地检测重组杆状病毒（rBV）的滴度，以缩短rBV的研发周期，精准把控其生产工艺和支撑其临床前安全评价，本试验利用杆状病毒表达系统中的pFastBac Dual质粒作为实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测的标准模板，以rBV基因组DNA作为检测模板，针对质粒和rBV共有的转座子序列设计引物，通过条件优化建立rBV的qPCR检测方法，并验证其特异性、重复性、准确度和精密度；以免疫染色法为对照，结合病毒生长动力学，评价2种方法在实际应用中的相关性、一致性和等效性。结果显示，qPCR法的最适退火温度为60℃，最优上游和下游引物浓度分别为4和2μmol/L；可特异性识别rBV；批间和批内变异系数均小于10%，重复性良好；理论检测值和实际检测值的相对误差和相对标准偏差均小于10%，准确度和精密度良好。在3.324×10~3～3.324×10~8 copies/μL范围内标准曲线呈现线性关系，最低检测限是33.24 copies/μL。对本实验室制备的34株rBV的检测结果显示，qPCR法检测值高于免疫染色法，但2种方法检测结果经Pearson相关性分析证实呈显著正相关（r=0.891 9,P<0.000 1），且经Bland-Altman一致性分析显示具有较好的一致性。rBV生长动力学比对显示，2种方法检测结果无显著差异（P > 0.05），具有等效性。结果表明，本试验成功建立了一种快速、有效的qPCR法，可在2 h左右准确测定rBV滴度，普遍适用于检测由细菌-杆状病毒穿梭表达系统构建的rBV，为其定量分析、工艺优化和质量控制提供了基础。
2026年04期 v.62 37-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 2415K] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ] - 肖涛;肖淑婷;何军;代宛丘;王浩;石佳佳;邬向东;刘平;陈小庆;
为了给鸽源禽毛滴虫病的早期诊断提供高效、准确的技术手段，本试验将套式聚合酶链式反应（PCR）技术应用于鸽源禽毛滴虫的检测，基于其18S rRNA基因序列设计特异性引物A1/S1和F2/R2，构建重组阳性质粒，优化反应条件以建立鸽源禽毛滴虫套式PCR方法，验证该方法的特异性和灵敏性，通过鸽毛滴虫复壮、人工感染检测和临床样品检测系统验证该方法的可靠性。结果显示，重组阳性质粒构建成功，并经测序验证其为鸽源禽毛滴虫的特异性序列。内、外引物的最适引物浓度均为0.08μmol/L，最适退火温度分别为58和56℃。该套式PCR方法与大肠杆菌、沙门菌、白色念珠菌、艾美耳球虫和刚地弓形虫等常见病原体无交叉反应，特异性较强，且具有极高的灵敏性，最低可检测至0.25 copies/μL。在人工感染检测中，套式PCR方法可检测时间限远优于体外培养法和传统镜检法。临床样品检测中，PCR检测阳性率为73.21%(41/56)，而套式PCR阳性率为96.43%(54/56)。结果表明，本试验建立的套式PCR方法特异性强、灵敏性高，具有较强的实际应用价值。
2026年04期 v.62 46-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 1619K] [下载次数：30 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ] - 谢云怡;臧新威;张捷;张勇;张博;田晨映;张奥;郝新芳;张学;赵勐;
为了解我国规模化牧场中奶牛主要产后代谢疾病的发病规律及其影响因素，本调查收集了2024年1—12月我国5个地区12省份54个规模化牧场268 671头分娩奶牛数据，其中包括3 170例临床型酮病、2 913例真胃移位、2 334例产后瘫痪和18 355例胎衣不下；分析统计各病例发病季节、地区、胎次、泌乳天数、体况评分（BCS）和妊娠天数对奶牛主要产后代谢疾病发病的影响。结果显示，临床型酮病、真胃移位、产后瘫痪和胎衣不下的发病率分别为1.18%、1.08%、0.87%和6.83%。夏季（6—8月）是临床型酮病和胎衣不下的高发季节，冬季（12—2月）是真胃移位和产后瘫痪的高发季节。华东地区临床型酮病和真胃移位发病率最高，分别为2.65%和1.32%；西北地区胎衣不下发病率最高（9.07%）。头胎奶牛4种产后代谢疾病的发病率均最低，随着胎次增加，奶牛产后代谢疾病的发病率逐渐上升。临床型酮病和真胃移位发病主要集中在泌乳0～21 d，产后瘫痪和胎衣不下发病主要集中在泌乳1～2 d。临床型酮病、真胃移位、产后瘫痪和胎衣不下均在BCS≥4.00分时发病率最高，分别为1.97%、1.79%、1.28%和7.29%。临床型酮病在妊娠天数≥280 d时发病率最高（1.45%）；真胃移位和产后瘫痪在妊娠天数≥290 d时发病率最高，分别为1.45%和2.45%；胎衣不下在妊娠天数<270 d时发病率最高（13.46%）。结果表明，针对季节特点、地区差异、胎次分布、体况管理和妊娠天数的精细化防控策略，可能有助于降低奶牛产后代谢疾病的发生率，从而提高奶牛的健康水平和牧场经济效益。
2026年04期 v.62 52-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 1209K] [下载次数：25 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 张嘉豪;刘田;王子昂;靳亚平;王爱华;杨王浩;袁亚林;陈华涛;
为探究宁夏灵武地区规模化奶牛养殖场临床型乳房炎发病规律，并鉴定其主要病原菌。本试验采用流行病学调查结合实验室检测方法，对该地区3个规模化奶牛养殖场2023年1—12月临床型乳房炎的发病规律进行调查，分析其发病率与月份、胎次、泌乳阶段和乳区的关联性；同时采集患病乳样，采用革兰染色、触酶试验和多重聚合酶链式反应（PCR）技术对病原菌进行分离和鉴定。结果显示，该地区3个规模化奶牛养殖场临床型乳房炎年平均发病率为1.7%，其中，冬季发病率最高（2.1%）；发病率随胎次增加而升高，≥5胎次奶牛的发病率最高（10.4%）；泌乳高峰期为临床型乳房炎的高发阶段（3.6%）；奶牛右侧乳区乳房炎的发病率显著高于左侧（P=0.002 0），其中，右前乳区的发病率最高（29.8%）。乳样检测结果显示，金黄色葡萄球菌为最主要病原菌，检出率为25.1%(46/183)。综上所述，宁夏灵武地区奶牛临床型乳房炎发病率呈现显著的季节性变化特征，并受胎次、泌乳阶段和乳区影响，为该地区奶牛临床型乳房炎的防控和治疗提供了重要依据。
2026年04期 v.62 59-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 1102K] [下载次数：35 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ] - 张怡淼;廖干;苏顺;郭腾愧;刘晨宇;步业林;胡灵倩;米日尼沙·瓦哈甫;布合力且木·艾依提;胡建军;谢文辉;
为对新疆维吾尔自治区南疆地区某规模化奶牛场犊牛出现疑似牛嗜血支原体感染症状展开病原学调查，本试验自该场随机采集青年牛和犊牛血样200份，通过血涂片姬姆萨染色镜检技术进行初步形态学观察，而后进行聚合酶链式反应（PCR）扩增，随机选取部分阳性样本进行核苷酸序列同源性分析和遗传进化分析。结果显示，经血涂片姬姆萨镜检确定该场奶牛阳性血样109份。PCR扩增结果显示，温氏支原体的检出率为27.5%(55/200)、牛嗜血支原体待定种的检出率为35.0%(70/200)、二者混合感染的检出率为17.5%(35/200)。同源性比对和遗传进化分析结果显示，本试验所获得的温氏支原体分离株与温氏支原体参考株相似度为96.7%～99.5%，处于同一大分支；牛嗜血支原体待定种分离株与牛嗜血支原体待定种参考株相似度为96.8%～99.8%，处于同一大分支。结果表明，该规模化奶牛场奶牛感染温氏支原体、牛嗜血支原体待定种。本试验结果为新疆地区牛嗜血支原体病的防控提供参考依据。
2026年04期 v.62 65-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 1766K] [下载次数：13 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 王睿敏;何奇松;龙凤;尹彦文;黄美芝;韦显凯;黄胜斌;韩银华;冯淑萍;陆文俊;屈素洁;胡丽萍;施开创;
为了解广西地区猪圆环病毒（PCV）1～4型的流行情况，本试验于2017—2023年从广西地区13个地市采集2 822份疑似PCV感染猪组织样品和棉拭子样品，采用四重TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）方法进行检测。结果显示，4种PCV总检出率为57.80%，其中，单重感染检出率为48.80%,PCV2检出率最高，为32.35%；混合感染检出率为9.00%,PCV1+PCV2的混合感染检出率最高，为3.08%。PCV单重感染情况分析发现，2017—2022年均未检测到PCV4感染，第四季度总体检出率显著高于其他3个季度，南宁市总检出率最高，来宾市未检测出PCV。结果表明，广西地区存在PCV1～4型感染，且以PCV2的感染率最高，混合感染主要以PCV1+PCV2为主，为该地区针对PCV1～4型的精准防控提供科学依据。
2026年04期 v.62 72-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 1750K] [下载次数：43 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 蒋磊;刘源;王一新;左玉柱;
为了探索猪流行性腹泻病毒（PEDV）母源抗体的建立方法，本试验对返饲+组织灭活苗与商品苗+组织灭活苗的免疫效果进行对比分析，对返饲母猪乳汁中PEDV免疫球蛋白A(IgA)含量进行衰减分析，测定母猪PEDV黏膜免疫的维持时间，并对组织灭活苗对乳汁PEDV IgA含量的影响进行分析。结果显示，返饲+组织灭活苗的免疫方式可以使母猪产生高水平的IgA抗体，且极显著高于商品苗+组织灭活苗的免疫方式（P<0.01）；母猪乳汁中PEDV IgA含量随着哺乳时间增加而不断降低，但仍能够为仔猪提供免疫保护；经产母猪初乳中PEDV IgA含量显著高于后备母猪（P<0.05）；母猪经过1次反饲并持续进行组织灭活苗跟胎免疫后，其初乳中PEDV IgA抗体高水平表达可持续5～6胎次之久；反饲后跟胎免疫组织灭活苗2个胎次的母猪初乳PEDV IgA含量与2个胎次前无显著差异（P=0.075），反饲后停止跟胎免疫的母猪，2个胎次后初乳PEDV IgA含量较2个胎次前极显著下降（P<0.01）。结果表明，返饲+组织灭活苗跟胎免疫可诱导高水平PEDV IgA抗体，同时组织灭活苗的持续跟胎免疫对维持高水平抗体至关重要。本试验结果为建立高水平PEDV母源抗体提供了参考。
2026年04期 v.62 78-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 1260K] [下载次数：19 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ]