- 安一娜;谭姝瑜;刘天龙;许建海;董彦君;
肿瘤已成为老年动物常见疾病。多种恶性肿瘤高表达血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK),但其对肿瘤生长的作用机理还未完全解析。为了探究SGK对肿瘤生长的影响及作用机制，本研究利用人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231),通过小干扰RNA(siRNA)敲低SGK,使用二甲氧唑黄(XTT)、溴脱氧尿苷(Brdu)和软琼脂克隆形成试验检测SGK对MDA-MB-231细胞增殖和转化的影响；利用过表达系统构建小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3/HER2/SGK和NIH3T3/HER2/SGK/p27,通过XTT、Brdu、流式细胞术和软琼脂克隆形成试验探究SGK是否通过抑癌基因p27蛋白调控肿瘤细胞的增殖转化和细胞周期；使用蛋白免疫印迹(WB)和免疫荧光(IF)技术分析SGK调控p27的机制；利用裸鼠构建体内肿瘤模型，通过计算形成肿瘤的体积和免疫组织化学(IHC)技术分析SGK调控肿瘤生长的机制。结果显示，敲低SGK能够显著下调肿瘤细胞的增殖和转化(P<0.05);过表达p27能够明显降低肿瘤细胞的增殖和转化(P<0.05),且G0-G1期的细胞数量增多，而过表达SGK能够逆转这些现象；此外，过表达SGK能够诱导p27定位于细胞质。在小鼠肿瘤模型中也显示，SGK能够降低p27蛋白水平，促进肿瘤生长。结果表明，无论在体外还是体内，SGK均能够通过抑制p27促进肿瘤细胞生长，提示SGK可以作为动物肿瘤疾病诊断和预后的指标，是肿瘤相关药物研发的潜在靶点。
2023年11期 v.59 1-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 993K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 金云云;刘怡宁;吴营霞;翟路峰;高盛果;高晓静;田克恭;
为了筛选免疫原性良好的鸡传染性鼻炎灭活疫苗生产用菌株，本试验对分离的5株A型、3株B型和3株C型副鸡禽杆菌的致病性和免疫原性进行分析。首先通过毒力试验筛选毒力较强的菌株，对筛选出的菌株进行最小发病剂量测定，再将最小发病剂量定为攻毒剂量，进行免疫原性分析和最小抗原含量测定。毒力试验结果显示，11株分离株均具有较强的毒力，从中筛选出毒力较强的A型菌2株(HN3株和HB2株)、B型菌2株(HN5株和SD4株)和C型菌2株(HN1株和SD3株)。最小发病剂量测定结果显示，A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株毒力最强，最小发病剂量分别约为2.0×10~4、1.8×10~3和2.3×10~3CFU。免疫原性分析和最小抗原含量测定结果显示，A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株具有良好的免疫原性，不仅可以抵抗同源菌株的攻击，还能对同血清型异源菌株提供良好的保护，免疫后血清HI抗体效价和阳性比例均较高，且与攻毒保护相关性较好，A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株的最小抗原含量分别为5.0×10~8、1.0×10~9和1.5×10~9CFU/mL。因此，毒力较强和免疫原性良好的A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株副鸡禽杆菌可作为鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的生产用菌株。
2023年11期 v.59 11-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 687K] [下载次数：212 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王红涛;李大吉;李昕芮;李孝桓;王佳园;刘彦骄;王冠一;邹雪;白鑫;
为了探究富硒黑木耳硒多糖对鲤鱼镉暴露的减毒作用，本试验选取540条鲤鱼分为6个组，分别为对照组、富硒黑木耳硒多糖组、未富硒黑木耳多糖组、镉暴露组、镉暴露富硒黑木耳硒多糖组和镉暴露未富硒黑木耳多糖组，其中镉暴露剂量为1 mg/L,多糖和硒多糖分别加入基础日粮，多糖组添加3 g/kg多糖，硒多糖组添加3 g/kg多糖和8.1μg/kg硒，试验周期为60 d。分别在试验30和60 d时，采集脾脏、肝脏、鳃、肾脏、大脑、肌肉和血液样本，检测各样本中镉浓度，血液红细胞数量、白细胞数量和血红蛋白含量，大脑乙酰胆碱酯酶、Na~+/K~+-ATP酶、多巴胺和5-羟色胺含量；在试验60 d时，采样的同时称取体重和肝胰脏重量，计算增重、生长速率、肝胰脏指数和饲料转化率。结果显示，与镉暴露组相比，富硒黑木耳硒多糖或未富硒黑木耳多糖能够显著降低组织和血液中镉浓度(P<0.05)、提高血红蛋白含量(P<0.05)、降低白细胞数量(P<0.05),提高大脑中乙酰胆碱酶、多巴胺、Na~+/K~+-ATP酶和5-羟色胺含量(P<0.05),且硒多糖效果优于多糖。结果表明，富硒黑木耳硒多糖具有一定的缓解鲤鱼镉暴露毒性作用。
2023年11期 v.59 19-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 910K] [下载次数：222 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 刘莉;陆辉;蔡高峰;武彩红;李玲;陈晓兰;张雪丽;
为了揭示茶树菇多糖(AAP)在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响，本试验以RAW264.7为研究对象，将其分为空白对照(CON)组、AAP低剂量(AAPL)组、AAP中剂量(AAPM)组、AAP高剂量(AAPH)组和脂多糖(LPS)组，采用噻唑蓝(MTT)比色法检测AAP对巨噬细胞RAW264.7的安全浓度；流式细胞仪检测巨噬细胞RAW264.7表面协同刺激分子抗原分化簇80(CD80)和86(CD86)的表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的浓度。结果显示，AAP浓度低于250μg/mL,不会对小鼠巨噬细胞RAW264.7产生毒性作用；与CON组相比，AAPM组和AAPH组RAW264.7细胞的表面分子CD80及所有AAP组RAW264.7细胞的表面分子CD86均极显著升高(P<0.01或P<0.001);AAPH组IL-1β及AAPM组和AAPH组IL-6、TNF-α和NO表达水平均显著增加(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结果表明，AAP能提高小鼠巨噬细胞RAW264.7表面分子CD80和CD86表达水平及细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和NO的分泌能力。
2023年11期 v.59 25-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 1067K] [下载次数：985 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：1 ] - 卢晨阳;赵聪;菅忆晨;岳治光;菅复春;宁长申;
为研究大蒜素对鸡皮刺螨的驱避效果和持效时间，本试验使用滤纸片法进行体外试验，测定0.5、1.0、1.5、2.0、3.0和4.0 mg/mL大蒜素溶液对鸡皮刺螨的驱避效果，并绘制驱避活性曲线；使用0.5%、1.0%、3.0%大蒜素水乳剂和长效驱避剂作为处理组，OFF驱蚊液和1.0%驱蚊酯长效驱避剂作为对照组，蒸馏水作为空白对照组，对不同浓度和剂型的大蒜素进行比较，在14 d内每2 d测定1次驱避率，并绘制驱避率变化曲线进行差异性分析。结果显示，大蒜素溶液驱避50%鸡皮刺螨时的大蒜素使用浓度(RC_(50))和驱避100%鸡皮刺螨时的大蒜素使用浓度(RC_(100))分别为1.98和3.74 mg/mL。随着大蒜素浓度增加，其驱避率升高，持效时间变长；3.0%大蒜素水乳剂在0～4 d内驱避效果优于0.5%和1.0%的大蒜素水乳剂，1.0%和3.0%大蒜素长效驱避剂在0～8 d内驱避效果优于0.5%大蒜素长效驱避剂。大蒜素长效驱避剂在相同时间内的驱避效果优于同浓度大蒜素水乳剂。与市售驱避剂相比，1.0%和3.0%大蒜素长效驱避剂驱避效果更好，且3.0%大蒜素长效驱避剂持效时间更长，可达8 d。结果表明，大蒜素对鸡皮刺螨具有驱避作用，且3.0%大蒜素长效驱避剂作用效果较好。
2023年11期 v.59 31-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 1096K] [下载次数：181 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 孟思雨;张卓亿;伍勇;孙志良;刘兆颖;
为了研究钩吻提取物对猪肝脏细胞色素P450(CYP450)和醌氧化还原酶(NQO1)活性的影响，本试验选用95%乙醇溶液制备钩吻醇提取物和0.5%硫酸溶液制备钩吻酸水提取物，将56日龄仔猪随机分为5个组，每组15只，分别为T1组(基础日粮)、T2组(基础日粮+150μg/mL钩吻酸水提取物)、T3组(基础日粮+25μg/mL钩吻醇提取物)、T4组(基础日粮+50μg/mL钩吻醇提取物)和T5组(基础日粮+100μg/mL钩吻醇提取物),连续饲喂47 d,取肝脏制备微粒体和胞液，通过比色法分析钩吻提取物对肝微粒体中氨基比林-N-脱甲基酶(AND)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性的影响，并探究钩吻提取物对肝胞液中NQO1活性的影响。结果显示，与T1组相比，T2组对AND和ERND活性无显著影响(P>0.05),而T3组和T4组对两者活性均具有诱导作用(P<0.05或P<0.01);2种提取物均能极显著抑制NOQ1活性(P<0.01)。结果表明，钩吻醇提取物对CYP450活性具有诱导作用，钩吻提取物对NQO1活性有抑制作用。本试验揭示了钩吻对药物代谢酶存在影响，与其他药物联合使用时存在相互作用，为钩吻在临床上的进一步应用提供药理学依据。
2023年11期 v.59 37-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 1042K] [下载次数：269 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 涂会鑫;董文龙;
前期研究从内蒙古手工奶酪中筛选出1株可拮抗金黄色葡萄球菌的乳酸菌Lacticaseibacillus saniviri(LS-1)。为探究LS-1的全基因组信息，挖掘其潜在细菌素编码基因簇，本试验对LS-1进行全基因组测序，对编码基因进行预测，并采用非冗余蛋白质(Nr)和基因本体(GO)数据库进行功能注释；利用BAGEL4数据库预测分析细菌素合成基因簇。结果显示，LS-1的基因组大小为2 356 714 bp, GC含量为47.87%。共预测到2 316个编码基因，其编码基因总长度为2 058 534 bp,平均长度为888 bp。LS-1所分泌细菌素属于Ⅲ类细菌素中的Enterolysin A(EnlA),推测EnlA可能通过裂解细胞壁来实现抑菌作用。本试验通过全基因组测序对LS-1基因组进行全面分析，从基因水平阐明其细菌素编码基因簇，进一步明确了菌株LS-1所产细菌素具有作为新型替抗产品的潜力。
2023年11期 v.59 42-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 1598K] [下载次数：778 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 许晓琳;张旻;景宏丽;陈冬杰;王慧煜;袁向芬;孔玉方;吕继洲;吴绍强;
为了鉴定天津市某养殖场鲤鱼腹腔内寄生的“面条样”虫体，本试验通过PCR方法扩增虫体的18S rRNA、COⅠ和COB基因序列，并进行分子鉴定和基因测序，分析3种基因的同源性、分子进化和系统发育关系。结果显示，寄生于鲤鱼体内的虫体的18S rRNA、COⅠ和COB基因序列分别与双线绦虫分离株MN204040.1(中国)、MN219466.1(中国)和EU241209.1(法国)的核苷酸序列同源性较高，为99.45%、98.74%和99.26%。基于18S rRNA、COⅠ和COB基因序列构建的系统发育树显示，本试验分离的绦虫裂头蚴与GenBank数据库中已鉴定的双线绦虫聚在同一分支上，且与双线绦虫中国武汉分离株的种属亲缘关系较近。本试验初步阐明获得的天津市双线绦虫分离株与其他种属之间的系统发育关系，为双线绦虫的分子鉴定和系统发育关系分析提供了数据支持。
2023年11期 v.59 47-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 1286K] [下载次数：139 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 齐盟;辛雅明;白绥明;胡亮;杨银凤;
为了探究来源于枯草芽孢杆菌细胞壁的肽聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)中β-防御素-1(SBD-1)表达的影响，本试验使用30μg/mL肽聚糖刺激ORECs不同时间(2、4、6、8、10和12 h),采用荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测SBD-1的mRNA和蛋白表达量，确定最佳刺激时间；再使用不同浓度的肽聚糖(0、10、20、30、40和50μg/mL)刺激ORECs 2 h,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的mRNA和蛋白表达量，确定最佳刺激浓度。结果显示：(1)使用30μg/mL肽聚糖刺激ORECs不同时间时，SBD-1的mRNA和蛋白表达量随着时间的增加呈先下降后升高的趋势，2 h时表达量最多并极显著高于对照组(P<0.001)。(2)使用不同浓度肽聚糖刺激ORECs 2 h时，SBD-1的mRNA和蛋白表达量随着肽聚糖浓度的升高呈现先升高后降低的趋势，在20μg/mL时表达量最多并极显著高于对照组(P<0.001)。(3)不同时间刺激试验和不同浓度刺激试验均不会对ORECs产生细胞毒性作用。结果表明，来源于枯草芽孢杆菌的肽聚糖能够诱导ORECs表达SBD-1,最佳刺激条件为20μg/mL枯草芽孢杆菌肽聚糖刺激ORECs 2 h。
2023年11期 v.59 52-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 1613K] [下载次数：360 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 刘云哲;赵格;赵建梅;王琳;杨腾腾;高玉斌;黄秀梅;张青青;张喜悦;刘俊辉;耿国芹;王君玮;邹明;
本试验旨在通过监测沙门菌在生猪屠宰各环节和猪肉产品中的污染分布和耐药状况，揭示沙门菌在猪肉生产过程中的传播及耐药情况。选取山东省5个代表性生猪屠宰场为风险观测点，采集肛拭子、屠宰环境拭子、水样品和胴体拭子共552份，参照食品安全国家标准和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对其中沙门菌进行分离培养和鉴定；参照微量肉汤稀释法检测其药物敏感性；利用多位点序列分型(MLST)鉴定沙门菌的基因型。结果显示，共分离获得58株沙门菌，总阳性检出率为10.5%(58/552);中小型屠宰场(15.6%,33/212)较大型屠宰场(7.4%,25/340)沙门菌污染严重；屠宰环节预冷前样品检出率最高，为26.7%(8/30);不同类型样品中肛拭子样品的检出率最高，为15.1%(16/106)。耐药性检测结果显示，58株沙门菌对氨苄西林的耐药率最高(96.6%,56/58),多重耐药率为96.6%(56/58);中小型屠宰场分离株较大型屠宰场的整体耐药严重，胴体拭子(46.4%,26/56)和肛拭子(28.6%,16/56)分离株的多重耐药率高于环境拭子(25.0%,14/56)。MLST基因分型结果显示，58株沙门菌共对应6个ST型，其中ST40型分布最为广泛，在各个环节中均有检出；其次是ST19型。结果表明，生猪屠宰环节沙门菌污染较为严重，需加强屠宰过程的卫生管控；各规模屠宰场应关注耐药菌和耐药基因在产业链和食物链的传播，制定合理的防控措施，防范其可能导致的食品安全风险。
2023年11期 v.59 59-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 1878K] [下载次数：190 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：2 ] - 汤朝晖;赵健超;任慧英;张灿;邹玲;尹燕博;刘宗柱;刘文华;
为了解鸡胚来源大肠杆菌的致病性和耐药性情况，本试验对山东省某白羽肉鸡孵化场6个不同批次种蛋孵化后随机抽检的174枚啄壳未出壳死胚的卵黄和胎粪进行了大肠杆菌分离。通过细菌培养、形态观察、生化试验方法鉴定大肠杆菌；通过小鼠攻毒试验和毒力基因PCR检测确定大肠杆菌分离株的致病性；利用纸片扩散法药敏试验检测大肠杆菌分离株的耐药性。结果显示，共分离鉴定大肠杆菌28株；小鼠攻毒试验结果显示，27大肠杆菌分离株对小鼠的致死率达到了50.0%以上，其中有24株超过了83.0%;在检测的14种毒力基因中，papA、papC、eaeA和vat四种基因未检出，fimC检出率最高(85.7%),另外9种毒力基因检出率介于3.6%～64.3%;菌株的致病性与携带的毒力基因数量大致呈正相关；耐药性检测结果显示，大肠杆菌分离株对10种抗菌药物具有不同程度的敏感性，耐药率介于17.9%～89.3%。结果表明，本试验分离的鸡胚源大肠杆菌绝大多数具有致病性，对临床常见抗菌药物存在不同程度的耐药。本试验结果为种鸡场加强大肠杆菌垂直传播的管理和控制以及临床用药的选择提供了参考依据。
2023年11期 v.59 69-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 1243K] [下载次数：794 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ]
- 杨昊岩;杨丽蓉;陈冰洁;张欣珂;杜涛峰;
为了解西安地区猫传染性腹膜炎(FIP)发病率与发病月份、年龄、品种、性别、临床症状和实验室检查结果的相关性，本调查对2018年6月1日—2022年3月31日于西北农林科技大学西安动物医院就诊的115例FIP病例进行统计分析。结果显示，FIP发病无明显季节性，且与性别无关。英国短毛猫发病率最高，占病例总数的27.43%。1.5周岁以下年龄的猫的发病率最高，占病例总数的81.98%。黄疸、食欲不振、腹围增大和发热为本病最常见的症状，实验室检查以白蛋白和球蛋白比值降低、总胆红素浓度升高为特征。本调查可为FIP的诊疗和防治提供参考依据。
2023年11期 v.59 103-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 1734K] [下载次数：834 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：15 ] - 李瑜祥;魏唐婷;胡秀花;苏瑞景;王少林;许建海;孟迪;胡艳欣;
为了确诊猪场1例疑似猪传染性胸膜肺炎的病例，本试验首先对该猪死亡前的临床症状进行了解，然后对死亡猪进行剖检并利用收集的病料进行细菌分离培养、质谱分析、PCR检测和组织病理学等实验室诊断。结果显示，该猪死亡前表现出体温升高、呼吸窘迫和鼻内流出血色样泡沫分泌物等临床症状，剖检发现胸腔积液、肺脏出血和肿大等病理变化。实验室诊断结果显示，胸腔积液、血液和肺脏等病料中分离获得的菌株为血清型7型胸膜肺炎放线杆菌。组织病理学观察结果显示，肺脏组织表现为出血性纤维素性肺炎，肺泡渗出液中可见蓝染的菌团；心脏、肾脏、淋巴结、肝脏和脾脏等其他脏器均有不同程度的出血、淤血、水肿和淋巴细胞浸润等组织病理学变化。综合以上诊断结果，确诊该猪为猪胸膜肺炎放线杆菌感染。
2023年11期 v.59 110-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 2610K] [下载次数：515 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 冯如意;张艳桃;张怡雯;李冬;张璇;陈凯旋;姚华;
宠物临床对犬血液肿瘤疾病的诊断主要基于病理组织学技术，目前在及时确诊方面仍有待完善。为探索系统、可靠和快速的犬血液肿瘤诊断方法，本试验拟对临床21例犬血液肿瘤疑似病例，通过血常规检查、血涂片分类计数、影像学检查、骨髓穿刺和骨髓液涂片技术综合应用以确诊肿瘤性质。结果显示，21例疑似病例被诊断为18例造血系统肿瘤和3例非造血系统肿瘤。18例造血系统肿瘤分别为5例急性淋巴细胞白血病(ALL),2例慢性淋巴细胞白血病(CLL),6例淋巴瘤，2例骨髓异常增生综合征(MDS)和3例急性粒细胞白血病(AML);3例非造血系统肿瘤均为肥大细胞瘤的骨髓转移，即肥大细胞白血病(MCL)。结果表明，临床采用血常规检查和血涂片分类计数可鉴定血液肿瘤患犬的细胞形态学异常，继之适应性应用骨髓细胞学技术辅助检查可确诊肿瘤的性质。因此，骨髓细胞学对犬血液肿瘤疾病的临床诊断具有重要辅助价值。
2023年11期 v.59 117-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 1560K] [下载次数：94 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 师光鑫;杨雪松;张晓远;黄渭超;李田田;郭庆勇;
为测量犬腹腔主要实质脏器的电子计算机断层扫描(CT)值，本试验从456例CT病例中筛选预研究脏器状态正常的犬53只，应用兴趣区域(ROI)测量法，95%置信区间标准，利用SPSS软件进行医学统计学分析。结果显示，犬正常状态肝脏CT值为(59.79±1.55) HU(P=0.887),胰腺CT值为(50.04±1.18) HU(P=0.529),脾脏CT值为(60.04±1.14) HU(P=0.806),肾上腺CT值为(27.02±1.00) HU(P=0.127),肾脏皮质CT值为(35.93±1.37) HU(P=0.312),肾脏髓质CT值为(30.27±1.00) HU(P=0.882);中华田园犬、贵宾犬和杂犬中各脏器CT值无显著差异，即犬的品种对于腹腔主要实质脏器的CT值无影响。结果表明，CT值可作为犬腹腔实质脏器的定量描述参数，应用于辅助诊断，提高诊断精确度。
2023年11期 v.59 123-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 1420K] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王晓佳;袁梨;喻元;周俊;姚勇;吴登虎;张邓华;唐家桂;冉启富;
本试验收集重庆动物园人工饲养的4只北白颊长臂猿和1只黄颊长臂猿血液样本用以检测血常规和血液生化指标，共检测了24项血常规指标和26项血液生化指标。结果显示，亚成体北白颊长臂猿和成年黄颊长臂猿血常规和血液生化指标均有部分不在成年北白颊长臂猿血常规和血液生化指标“平均值±标准差”内，表明不同年龄、性别和物种可能影响长臂猿血常规和血液生化指标检测值。本试验是健康长臂猿血常规和血液生化指标的国内首次详细检测，为国内圈养长臂猿血液标准值的确定提供了基础数据，对长臂猿的饲养繁育、健康管理和疾病诊断等具有指导意义。
2023年11期 v.59 128-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 1394K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ]