- 黎明;辛菲;郑侃;蔡清波;杨延丽;贺笋;
为了提高猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白病毒样颗粒(VLPs)的产量，本试验探索了采用加热法促进杆状病毒-昆虫细胞表达的Cap蛋白体外组装的可行性，通过高效液相尺寸排阻色谱法定量PCV2 Cap VLPs,分析4～56℃加热0～10 h对细胞培养液上清中PCV2 Cap VLPs浓度的影响，并采用透射电子显微镜(TEM)验证；通过监测45℃加热6 h后的细胞培养液上清在4℃放置6个月中PCV2 Cap VLPs的浓度变化，验证PCV2 Cap VLPs的稳定性；通过全能核酸酶消化试验验证宿主核酸对PCV2 Cap VLPs组装的作用；对比加热与未加热工艺的PCV2 Cap VLPs纯化收率，并通过高效液相尺寸排阻色谱偶联多角度激光散射、圆二色光谱、差示扫描量热法和微量热泳动分析2种工艺所得PCV2 Cap VLPs表征的一致性。结果显示，细胞培养液上清中PCV2 Cap VLPs浓度随着温度和时间的延长逐渐升高，其中45℃加热6 h后PCV2 Cap VLPs浓度为未加热的3.77倍，TEM观察进一步验证PCV2 Cap VLPs浓度增加。加热后形成的PCV2 Cap VLPs在4℃储存6个月浓度稳定，未出现解聚现象。全能核酸酶消化试验显示，加热过程中宿主核酸的作用并非关键因素。采用45℃加热6 h后再进行纯化，PCV2 Cap VLPs纯化收率是未加热工艺的2.9倍。经分析，加热与未加热工艺所得PCV2 Cap VLPs具有一致的分子量(2.385×10~6和2.361×10~6 Da)、水力学半径(10.1和10.2 nm)、热转变温度T_m(67.22和66.92℃)、二级结构和特异性抗体亲和力(49.0和76.5 pmol/L),表明两者具有相近结构。本试验为PCV2 Cap VLPs的生产探索了一个提高产量的新方法，为兽用疫苗的研发提供了在抗原性质分析方法上的借鉴。
2024年10期 v.60 1-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 2318K] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 徐凤霞;孙万里;张亚文;常爽;王一新;赵鹏;
为明确禽源α干扰素(IFN-α)对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)体内外增殖的抑制效果，本试验在细胞和动物水平上分别采用鸡胚成纤维(DF-1)细胞和海兰褐鸡作为模型，于REV接种前(预防)和接种后(治疗)分别添加不同浓度的禽IFN-α处理，分析禽IFN-α在体外和体内对REV增殖的影响。体外试验结果显示，与阳性对照组相比，禽IFN-α浓度为33 IU/mL的治疗组72 h细胞和上清中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05),禽IFN-α浓度为33 IU/mL的预防组72 h细胞中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05)。通过比较各组海兰褐鸡的平均体重、血液中REV阳性率和病毒载量、泄殖腔REV阳性率和排毒量、免疫器官指数和病毒载量系统评估禽IFN-α对REV体内增殖的影响，结果显示，与阳性对照组相比，禽IFN-α浓度为1 500 IU的治疗组海兰褐鸡21和28日龄时体重显著升高(P<0.05),14日龄时肝脏发育指数以及14和28日龄时的脾脏发育指数显著降低(P<0.05),14日龄时血液和脾脏中病毒载量显著降低(P<0.05),7和21日龄时泄殖腔排毒量显著降低(P<0.05)。本试验在体外细胞和体内动物2个层面均证实了禽IFN-α对REV增殖具有显著的抑制效果，这不仅为禽网状内皮组织增殖病的防控策略提供了新的思路和辅助手段，也为未来抗病毒药物的研发和应用提供了科学依据。
2024年10期 v.60 10-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 2437K] [下载次数：122 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 景瑾;邵义祥;
为了研究热休克蛋白70(HSP70)基因对C57BL/6J-角膜混浊(B6-Co)小鼠眼睑成纤维细胞生物学功能的影响，本试验将前期研究并验证的siRNA-HSP70转染C57BL/6J(B6)小鼠眼睑成纤维细胞敲低HSP70基因，体外构建HSP70基因过表达载体转染B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞过表达HSP70基因，通过实时荧光定量PCR和Western blot验证转染效率；CCK8法检测B6和B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞的增殖水平；Annexin V-FITC法检测B6和B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞的凋亡水平，Transwell试验检测B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞的迁移能力。结果显示，B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞转染HSP70基因过表达载体后，HSP70在mRNA和蛋白水平的表达均极显著提高(P<0.01);siRNA-HSP70组B6小鼠成纤维细胞增殖水平极显著低于siRNA-NC组(P<0.01),凋亡水平显著高于siRNA-NC组(P<0.05或P<0.01);pcDNA3.1-HSP70质粒转染组B6-Co小鼠成纤维细胞增殖水平和细胞迁移能力均极显著高于pcDNA3.1-NC组(P<0.01),凋亡水平极显著低于pcDNA3.1-NC组(P<0.01)。结果表明，B6-Co小鼠眼睑成纤维细胞转染过表达质粒后，HSP70基因表达显著提高，并显著促进细胞增殖和迁移，抑制细胞凋亡；B6小鼠眼睑成纤维细胞中敲低HSP70基因表达后，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡；故HSP70表达水平显著影响成纤维细胞的生物学行为。
2024年10期 v.60 18-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 3366K] [下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 候梦哲;张家浩;刘祥杰;邢潇月;李虎;李莲瑞;
为确定新疆阿克苏地区某鸡场鸡只精神不振、采食量减少和死亡的原因，本试验对采集自该鸡场病死鸡的肝脏等器官进行病原的分离鉴定、形态学观察、生化鉴定和16S rRNA基因PCR鉴定，通过PCR检测毒力基因的携带情况，并进行动物回归试验和药物敏感性试验以分析其致病力和耐药性。结果显示，从病死鸡内脏器官中分离到1株革兰阴性短杆菌，鉴定该分离菌株为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii);该分离菌株携带sip和ompX两种毒力基因；在3～7 h处于对数生长期；可感染雏鸡，并引起雏鸡严重脱毛和死亡，死亡雏鸡以肝脏肿大出血和肺脏有出血点为主要病理变化，与自然发病鸡症状一致；对替加环素、阿米卡星和多黏菌素B表现为敏感，对多西环素、链霉素和新霉素表现为中介，对其他18种抗生素表现为耐药。结果表明，分离菌株对动物具有潜在的致病性。本试验首次在病死鸡中分离出阪崎克罗诺杆菌，扩大了鸡体内致病微生物的种类，并对该菌的生物学特性进行了初步探究，以期对动物源阪崎克罗诺杆菌感染的临床用药和防控提供参考。
2024年10期 v.60 25-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 1216K] [下载次数：223 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨丹娇;范燕迪;张敏;刘怡雯;叶忠明;吴建平;且华敏;王靖皓;周菡;蓝岚;周泷;汤承;
为了解四川省甘孜藏族自治州藏猪群体内猪细环病毒(TTSuV)的流行情况和遗传变异特点，本试验从该地区17个藏猪养殖场采集呼吸道症状明显的猪鼻拭子、肺脏组织和肺泡灌洗液样本共计101份进行宏基因组测序、TTSuV PCR检测和鉴定、全基因组和ORF1基因遗传演化和遗传变异分析以及ORF1蛋白氨基酸遗传变异分析和ORF1蛋白预测分析。结果显示，TTSuV总阳性率为19.8%(20/101),其中，TTSuV1总阳性率为6.93%(7/101),TTSuVk2总阳性率为15.84%(16/101),TTSuV1和TTSuVk2混合阳性率为2.97%(3/101);获得3株TTSuV全基因组序列，分别命名为Scgz-1(2 815 bp)、Scgz-2(2 578 bp)和Scgz-3(2 757 bp);3株毒株均属于TTSuVk2型，其中Scgz-1毒株属于TTSuVk2b亚型，Scgz-2和Scgz-3毒株属于TTSuVk2a亚型；3株毒株全基因组序列彼此之间的相似性为56.2%～74.9%,其中ORF1基因核苷酸序列相似性为53.6%～73.6%;3株毒株ORF1蛋白氨基酸序列与参考毒株氨基酸序列相似性为43.2%～98.5%,序列之间差异性均较大；3株毒株的ORF1蛋白均为不稳定蛋白且复杂。本试验对川西高原地区藏猪的TTSuV开展调查分析，发现藏猪群中流行TTSuV毒株基因变异较大，可为该地区藏猪呼吸道疾病的防控提供参考。
2024年10期 v.60 32-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 3461K] [下载次数：174 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 丁宇丽;李秦玲;林德贵;
为研究犬食物过敏性皮炎患部病原菌分布和耐药性特点，本试验在中国农业大学动物医院收集12例犬食物过敏病例和28例犬非食物过敏病例，通过测定细菌DNA序列鉴定患部病原菌，分析病原菌分布情况；选取优势病原菌，通过Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法进行药物敏感性试验，通过PCR测定耐药基因。结果显示，本试验中犬食物过敏病例的患部病原菌主要为葡萄球菌属和芽孢杆菌属，以革兰阳性菌为主，优势病原菌为伪中间型葡萄球菌。犬食物过敏病例分离菌株属于10个菌属，17个菌种；犬非食物过敏病例分离菌株属于19个菌属，39个菌种。24株伪中间型葡萄球菌分离株对亚胺培南、阿米卡星、阿莫西林-克拉维酸和头孢唑林的敏感性高(均高于90.0%),对青霉素G和氨苄西林高度耐药(均高于95.0%),检测出携带率最高的耐药基因为大环内酯类erm(C)和β-内酰胺类bla_Z,携带率最低的耐药基因为氨基糖苷类aac(6′)-aph(2″)。在犬食物过敏病例中，通过检测β-内酰胺类mecA基因确定耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌(MRSP)21株，占比87.5%;甲氧西林敏感伪中间型葡萄球菌(MSSP)3株，仅占比12.5%。结果表明，与犬非食物过敏病例相比，犬食物过敏病例的患部病原菌菌属和菌种多样性较差；临床中犬食物过敏病例的病原菌具有耐药趋势，应合理使用抗菌药物。本试验可丰富临床上犬食物过敏性皮炎的病例资料和病原学资料。
2024年10期 v.60 40-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 1030K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 高梦丽;廖荣莉;李贺;柳泰;卿任科;唐红剑;郑金;余兴龙;
为了解“饲料禁抗”后规模猪场中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的流行情况，本试验于2021―2023年在16个未免疫疫苗的APP阳性规模猪场采集不同生产阶段猪群的2 286份血清样本，应用间接ELISA进行抗体检测。结果显示：(1)16个规模猪场血清样本的APP抗体总阳性率为61.2%(1 399/2 286),高于文献报道的“饲料禁抗”前猪群阳性率(20%～53%);(2)在不同生产阶段的猪群中，母猪APP抗体阳性率最高(92.4%,545/590),其次为哺乳期仔猪(87.6%,227/259),而后从高到低依次是育肥后期、保育期和育肥中期猪群，APP抗体阳性率分别为63.6%(361/568)、43.7%(129/295)和35.3%(122/346),育肥早期猪群的APP抗体阳性率最低，为6.6%(15/228);(3)初产母猪的APP抗体阳性率(73.8%)明显低于其他胎次母猪(96.3%～97.4%);(4)猪只的APP母源抗体随着日龄的增长而下降，基本在90日龄时降到最低，此后猪群因APP感染而导致APP抗体水平和阳性率均开始缓慢上升，到肥猪出栏前仍一直上升。结果表明，饲养密度增加和推迟肥猪出栏是导致规模猪场APP感染大幅上升的重要因素。
2024年10期 v.60 48-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 1160K] [下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张宝玲;郭志刚;徐闯;韩博;高健;
以奶牛酮病和产后低血钙作为代表的群发性营养代谢病，对我国奶业的生产效益造成了显著影响，为了应对这一挑战，本试验对10个规模化牧场进行了流行病学调查，分析其发病特征。试验于2022年11月—2023年10月收集了我国10个大型牧场(存栏量>4 000头)产后瘫痪和临床型酮病奶牛的发病数据，分析季节性因素和奶牛个体因素(泌乳天数、体况和胎次)与这2种疾病的关系，揭示疾病发生规律。结果显示，秋季是产后瘫痪的高发季节，发病率达到1.87%(400/21 379);临床型酮病则在夏季发病率最高，为0.93%(326/35 010);产后瘫痪的发病高峰集中在泌乳天数1～3 d,而临床型酮病的发病高峰则集中在泌乳天数3～15 d;所调查牧场中，产后瘫痪和临床型酮病奶牛干奶时和分娩时体况评分主要集中在3.25和3.50分(5分制)。5胎以上奶牛2种疾病的发病率均较高。本试验结果不仅为识别和监测高风险牛群、制定针对性的预防措施提供了重要的参考信息，还有助于提高奶牛群的健康水平和生产效率。
2024年10期 v.60 55-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 1494K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 柯丽婷;宋丹丹;王菲;侯广争;曹鹏程;丁艳磊;刘琪琦;范云鹏;
为了建立一种灵敏度高、无需冷链运输、操作简便的猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)检测方法，本试验以FIPV的N基因序列为靶基因，进行体外转录制备阳性参考品；筛选特异性引物和探针；对反应体系和条件进行优化；筛选适宜的冻干保护剂并对本试验方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估；对冻干体系进行稳定性试验，预测室温条件下的有效期；利用本试验方法和商品试剂盒对临床采集的11份确诊FIPV感染病料进行检测，对比二者检出率；绘制接受者操作特征(ROC)曲线，计算曲线下面积，评估本试验方法的诊断效果，计算Cut off值。结果显示，本试验方法可特异性检出FIPV;最低检测限为43 copies/mL;组内和组间重复试验变异系数分别为0.12%～1.67%和0.03%～1.62%;室温有效期至少可达567 d;本试验方法的检出率为100%,市售试剂盒的检出率为91%;ROC曲线下面积为1,Cut off值为39.40。结果表明，本试验建立的FIPV实时荧光定量PCR(冻干型)检测方法具有灵敏度高，方便运输且易于贮藏的优势，可为FIPV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。
2024年10期 v.60 61-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 1931K] [下载次数：605 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 李倩倩;黄英;陈翔鸿;宋文博;杨柳;龙云志;余道兵;梁巩;黄超;汤细彪;
为建立一种鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，本试验依据PRV HB-98株和HB2000株的gE和gI基因缺失片段设计特异性引物和探针，优化反应体系，绘制标准曲线，进行特异性试验和敏感性试验，对临床样本和疫苗样本进行检测，并与商品化试剂盒的检测结果进行对比。结果显示，本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线R~2为0.997 1;该方法特异性强，能区分PRV与其他常见的猪病原体；敏感性高，最低检测限为10 copies/μL;对临床样本的检测结果与商品化试剂盒的检测结果一致；能够区分PRV gI/gE基因部分缺失的疫苗株和野毒株。结果表明，本试验建立了一种特异性强、灵敏度高、适用范围广的鉴别诊断PRV gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。
2024年10期 v.60 68-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 1810K] [下载次数：436 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 陈平平;嵇辛勤;阮涌;王晗晗;罗晓宇;安而立;龙丹丹;段志强;
为了建立一种有效、快速、准确的鸭坦布苏病毒(DTMUV)TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法，本试验针对NCBI发布的DTMUV E基因保守序列设计特异性引物和探针，建立qPCR反应体系。通过制备的标准质粒建立标准曲线，评估该方法的特异性、敏感性和重复性，并使用该方法对临床样本进行检测。结果显示，所建立的标准曲线相关系数为0.999 5,有良好的线性关系；该方法可特异检测DTMUV;对标准质粒的最低检测限为2.72×10~2 copies/μL,是普通PCR的100倍；CT值组内变异系数为0.97%～1.32%,组间变异系数为1.24%～1.79%;人工感染DTMUV的20份鸭胚成纤维细胞样本以及12份人工攻毒2 d的雏鸭脾脏组织样本和12份泄殖腔棉拭子样本阳性率为100%(44/44);疑似感染的12份活鸭泄殖腔棉拭子阳性率为25.00%(3/12),14份病死鸭脾脏组织样本阳性率为28.57%(4/14)。结果表明，本试验建立的TaqMan探针qPCR方法有良好的敏感性、准确性和重复性，能特异检测DTMUV,适用于临床快速检测，为DTMUV的分子流行病学调查和临床疾病诊断提供了技术支撑。
2024年10期 v.60 75-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 1477K] [下载次数：459 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 姚鑫;叶昕熠;张鑫鑫;符文真;刘雅红;周宇峰;
为测定加米霉素与常见家畜的血浆蛋白结合率(PPBR),本试验建立猪、牛和羊血浆中加米霉素的高效液相色谱-串联质谱检测方法，并对该方法的专属性、检测限、定量限、标准曲线、提取回收率和精密度进行考察。采用平衡透析法测定不同浓度(0.1、0.5和2.5μg/mL)加米霉素与猪、牛和羊的PPBR。结果显示，在考察浓度范围内，加米霉素在猪、牛和羊血浆中的专属性较好，检测限和定量限分别为0.5和1.0 ng/mL,标准曲线呈现良好的线性关系(r>0.997)。加米霉素在猪、牛和羊血浆中的提取回收率介于91.2%～107.8%,日内和日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于6.59%和9.16%。加米霉素与猪、牛和羊的平均PPBR分别为(21.86±4.19)%、(27.51±6.95)%和(19.64±3.58)%,且在考察的浓度范围内无浓度依赖特征。本试验所建方法准确可靠，可用于测定加米霉素与猪、牛和羊的PPBR。本试验结果可为加米霉素的药物代谢动力学研究及其在兽医临床中的科学用药提供参考依据。
2024年10期 v.60 81-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 1710K] [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ]