- 辛雅明;白绥明;白刚;高景鹏;樊翀宇;韩彩霞;周伟;张文彦;永荣;齐盟;肖红;杨银凤;
为了探索枯草芽孢杆菌细胞壁诱导绵羊β-防御素-1(SBD-1)表达的主要信号转导途径，本试验首先使用反复冻融法与超声波破碎法相结合的方法破碎枯草芽孢杆菌并收集其细胞壁，酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法分析细胞壁成分及其含量，然后利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot, WB)方法检测枯草芽孢杆菌细胞壁刺激绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)后通路因子(TLR-2、MyD88、NF-κB、p38、JNK和ERK1/2)mRNA和蛋白的表达变化，最后使用通路抑制剂分别阻断NF-κB、p38、JNK和ERK1/2信号通路，用枯草芽孢杆菌细胞壁刺激ORECs并检测刺激后SBD-1 mRNA表达变化，从而确定诱导SBD-1表达的主要信号通路。结果显示，枯草芽孢杆菌细胞壁制备成功，细胞壁主要成分为肽聚糖和磷壁酸，含量分别为(90.85±0.91)%和(8.85±0.11)%。与对照组相比，枯草芽孢杆菌细胞壁刺激ORECs后信号通路因子(TLR-2、MyD88、NF-κB、p38、JNK和ERK1/2)的mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),使用通路抑制剂阻断各个信号通路后再刺激ORECs,SBD-1 mRNA表达水平均极显著下降(P<0.01),且添加NF-κB和JNK抑制剂组下降幅度最大。结果表明，枯草芽孢杆菌细胞壁可能通过TLR-2-MyD88-NF-κB/MAPK信号通路调控ORECs SBD-1的表达。
2023年10期 v.59 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1410K] [下载次数：352 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：102 ] - 和彦良;李真光;苏玮玮;郝艳霞;武华;朱国强;
为了解2018—2021年我国部分省份牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的流行情况，本试验采用ELISA和荧光定量PCR方法对来自河北、河南和山东等8个省份的5 270份血清和1 363份组织样品分别进行BVDV抗体和核酸检测，同时利用微量血清中和试验方法检测BVDV疫苗接种场采集的1 449份血清的中和抗体水平。BVDV抗体检测结果显示，在8个省份采集的5 270份血清样品中，BVDV抗体总阳性率为78.39%,其中河北抗体阳性率最高(90.03%),甘肃抗体阳性率最低(70.95%);2018—2021年调查区域牛群BVDV抗体阳性率呈逐年上升趋势，年阳性率分别为75.59%、75.44%、86.24%和86.62%。BVDV核酸检测结果显示，采集的1 363份组织样品中BVDV核酸总阳性率为7.19%,河北最高(20.71%),山东最低(1.17%);2018—2021年调查区域牛群BVDV核酸年阳性率分别为5.78%、7.96%、3.57%和11.76%。疫苗免疫牛群的抗体持续监测结果显示，在检测的1 449份牛血清样品中，BVDV中和抗体效价不低于1∶128的比例达到90.48%;2018—2021年调查牛群BVDV中和抗体效价平均值由1∶938.2上升至1∶1 579.3,牛群BVDV中和抗体水平逐渐集中分布在1∶1 000～1∶2 000,表明疫苗提高了牛群整体的免疫状态。本试验通过调查分析国内主要养牛省份的BVDV流行情况，更新了我国BVDV的流行病学数据，结合疫苗免疫后牛群的抗体监测数据，证实BVDV在国内的流行日趋严重，加强疫病监测和疫苗预防接种将成为我国BVDV防控的关键。
2023年10期 v.59 9-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 976K] [下载次数：611 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：102 ] - 田梓翰;吴昊;阮胜男;任文慧;吴昊蔚;何启盖;
为了诊断某场育肥猪群突发呼吸系统疾病、高死亡率的病因，评估防治方案对该疫病的控制效果。本试验通过现场观察发病猪临床症状、濒死猪器官病变情况，结合实验室检测结果开展综合诊断；根据诊断结果制定了相应的防控方案并评价其效果。结果显示，该场发病猪为副猪格拉瑟菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的混合感染。制定的防控方案为：群体给药酒石酸泰万菌素和复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液控制住细菌感染后，迅速接种PRRSV弱毒苗，隔离发病猪，加强环境和流动人员消毒，记录不同栋舍猪群的存栏量和周死淘率直至猪群出栏。实施紧急防控方案后，暴发栋舍周死淘率显著低于采取措施之前(P<0.05),相连栋舍未暴发疾病。结果表明，群体给药酒石酸泰万菌素和复方磺胺间甲氧嘧啶钠，免疫PRRSV弱毒苗，配合控制人员和物资流动、加强猪舍环境管理等防治措施，能够有效的控制副猪格拉瑟菌和PRRSV混合感染。
2023年10期 v.59 16-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 1621K] [下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：63 ] - 吉秀家;黄灿灿;毛海燕;岳斌;李新月;张小花;武权生;
本试验旨在建立客观、稳定的子宫内膜异位症(EMs)小鼠模型，为探究EMs发病机制和治疗方法等提供依据，采用同种异体移植法构建BALB/c小鼠子宫内膜异位症纤维化模型，通过造模后不同时间段小鼠体重、热痛潜伏期、腹腔粘连评分和异位灶体积初步评价模型；采用苏木精-伊红(H.E.)染色观察异位灶形态，Masson染色评估异位灶纤维化程度，Western blot检测异位灶组织中纤维化相关蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、纤连蛋白(FN)、人胶原蛋白I(Collagen I)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达，进一步评价模型并分析不同时间段异位灶纤维化程度。结果显示，模型组小鼠在造模后14 d体重增长明显，与对照组相比，21和28 d差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。模型组热痛潜伏期随着造模时间的延长而逐渐缩短，与造模后7 d比，14、21和28 d均极显著缩短(P<0.01)。模型组小鼠腹腔粘连评分随着造模时间的延长而显著增加，与造模后7 d比，21和28 d均极显著增加(P<0.001)。异位灶体积呈先增大后缩小再增大的趋势，与造模后7 d比，14 d极显著缩小(P<0.01),28 d体积再次极显著增大(P<0.01)。H.E.染色显示，模型组异位灶含子宫内膜样腺体增生，腺体边缘有不同程度炎细胞浸润。Masson染色显示，异位灶有胶原沉积，且随造模时间的延长有增多的趋势，与造模后7 d比，21和28 d沉积极显著增多(P<0.01或P<0.001)。TGF-β1、E-cadherin、Collagen I、α-SMA和FN在异位灶中均有显著性表达，其中E-cadherin的表达量随造模时间延长而降低，其余蛋白的表达量随造模时间延长而递增。结果表明，同种异体移植法构建子宫内膜异位症纤维化小鼠模型成模率高，可作为一种稳定的EMs建模方法。
2023年10期 v.59 22-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 2176K] [下载次数：454 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：23 ] - 董媛;李汶柯;孟桂先;刘磊;尹茉莉;王会岩;
为了制备牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18),并预测其理化性质和功能，本试验优化密码子并合成boPAG18基因，构建pET30a-boPAG18重组质粒。以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的蛋白质表达量为指标，优化装液量、诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度条件，采用亲和层析法纯化boPAG18,SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定。预测boPAG18的疏水性、信号肽、修饰位点、结构和蛋白相互作用。结果显示，经双酶切鉴定，pET30a-boPAG18重组质粒构建成功，boPAG18基因1 143 bp,表达蛋白约38 kDa。确定最佳表达条件为在OD_(600 nm)值为0.6,装液量为40 mL,IPTG终浓度为0.2 g/L,37℃诱导4 h。纯化的boPAG18纯度高达98%,浓度为2.63 mg/mL。该蛋白分子式为C_(1923)H_(3007)N_(519)O_(541)S_(17),分子质量为42.6 ku,等电点为9.31,亲水性平均值为-0.041,为两性蛋白，蛋白质不稳定指数为42.41,在水中不稳定；脂肪系数为88.43,有381个氨基酸；消光系数为47 370 mol~(-1)·cm~(-1),半衰期为30 h。boPAG18前15个氨基酸为信号肽，无跨膜区域；有糖基化修饰位点57个，磷酸化修饰位点68个，B细胞抗原表位13个，二级结构中α-螺旋占比19.42%、β-转角占比5.77%、无规则卷曲占比44.88%、延伸链占比29.92%;有7个相互作用蛋白，可能参与了母体在妊娠期的泌乳、抗菌和神经保护等调节功能。本试验为深入研究boPAG18的结构和功能提供了数据支持。
2023年10期 v.59 31-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 2093K] [下载次数：376 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：28 ] - 陈宇;焦典;赵文博;张程;姚红;
为确证氟苯尼考耐药基因fexA在弯曲菌中的功能并分析fexA基因遗传环境，本试验采用药物敏感性试验、聚合酶链式反应(PCR)、fexA单基因克隆、电转化、全基因组测序和分析方法对fexA基因功能进行鉴定，并基于全基因组序列对fexA基因环境进行分析。结果显示：氟苯尼考对构建的单基因克隆11168-fexA菌株最小抑菌浓度(MIC)值为32μg/mL,比受体菌株NCTC 11168对氟苯尼考的MIC值提高了32倍；fexA基因定位于长度为13 793 bp的新型质粒(pC19-fexA),该质粒不能通过电转化转移至受体菌。综上所述，fexA基因可介导弯曲菌对氟苯尼考的高水平耐药表型；携带fexA基因的质粒虽然不能通过电转化发生水平传播，但其作为fexA基因的新型载体应得到关注。
2023年10期 v.59 40-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 1673K] [下载次数：162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：19 ] - 王晓茵;武云龙;孙晓亮;李木子;宋翠平;曹旭敏;霍乃蕊;赵思俊;
为了建立同时测定鸡肉中14种喹诺酮类和16种磺胺类药物残留的超高效液相色谱-荧光检测法，本试验将鸡肉样品绞碎均质后，用磷酸盐缓冲液(PBS)提取后，固相萃取柱净化，经荧光胺衍生，超高效液相色谱-荧光检测器进行定性和定量分析，系统考察荧光胺衍生条件对喹诺酮类和磺胺类药物荧光响应的影响。结果显示：14种喹诺酮类药物和16种磺胺类药物均可有效分离，在0.1～400 ng/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999,方法定量限为0.5～10.0μg/kg; 30种药物的平均回收率为62.2%～109.0%,批内、批间相对标准偏差分别为1.5%～17.7%和1.9%～16.2%。结果表明，本试验建立的方法可满足我国以及欧盟等国家的限量要求，适用于鸡肉中喹诺酮类和磺胺类药物残留的高通量筛查工作。
2023年10期 v.59 46-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 1977K] [下载次数：380 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：36 ] - 张孟迪;朱海波;朱余军;伍妙梨;练月晓;黄碧洪;葛叶;丛锋;
为了建立一种灵敏快速检测禽脑脊髓炎病毒(AEV)的Luminex xTAG技术方法，本试验针对AEV高度保守的VP1基因设计了1对特异性引物，在上游引物的5′端通过Spacer18间隔添加Tag序列，下游引物的5′端标记生物素，进行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增，构建质粒标准品，通过优化反应体系建立Luminex xTAG检测方法。用所建立的Luminex xTAG方法进行特异性、敏感性和重复性试验，并与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法同时对45份脑组织临床样品进行检测。结果显示，所建立AEV Luminex xTAG检测方法与传染性法氏囊病毒、禽传染性贫血病病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、马立克病毒和禽传染性支气管炎病毒无交叉反应；灵敏度可达1×10~2 copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于4.0%;对45份临床样品的Luminex xTAG检测结果与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测结果一致。结果表明，所建立的AEV Luminex xTAG检测方法特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好，可用于AEV的快速检测。
2023年10期 v.59 54-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 1342K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：15 ] - 吴海港;武娴;倪晗;陈建文;刘锦妮;
为了制备布替萘芬醇质体，筛选出最佳处方，并对其进行质量评价，本试验采用乙醇注入法制备布替萘芬醇质体，以包封率为评价指标，通过正交试验优化处方，并对其形态、粒径和稳定性进行考察。结果显示，布替萘芬醇质体最佳制备工艺为：布替萘芬∶大豆卵磷脂为2∶1,无水乙醇∶水为4∶6,乙醇∶丙二醇为9∶1,吐温-80含量为0.1 mL,45℃水浴温度下以900 r/min持续搅拌40 min;制备的布替萘芬醇质体外观为泛有蓝光的澄清液体，形状为球形或近球形，透射电镜观察呈圆球形且分布均匀；布替萘芬醇质体平均粒径为(262.40±2.47)nm,平均包封率为(81.36±1.09)%;4℃和25℃条件下放置21 d后，布替萘芬醇质体呈淡黄色均一稳定的液体，平均包封率分别为(77.62±1.75)%和(73.09±2.23)%,渗漏率分别为4.60%和10.19%。结果表明，乙醇注入法制备布替萘芬醇质体操作易行，包封率较高，稳定性良好，具有较好的应用前景。
2023年10期 v.59 59-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 1564K] [下载次数：217 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：17 ] - 张帅华;常建宇;
为研究北京地区信鸽中禽白血病(AL)的流行情况，本试验从北京市沙河地区某市场抽样采集疑似AL信鸽血液样本共54份，通过检测p27抗原对其进行禽白血病病毒(ALV)鉴定；将分离株接种SPF鸡后检测其血清中ALV-Ab和ALV-J抗体，对分离株env基因进行扩增和测序，与各亚型ALV参考株gp85基因核苷酸序列进行同源性分析，并构建系统发育进化树。结果显示，从54份样本中分离得到1株ALV,命名为CAU1501。ALV-J抗体检测全部呈阴性，ALV-Ab抗体检测有4份呈阳性。CAU1501的gp85基因核苷酸序列与2007年美国分离株PDRC-3249同源性最高，与国内2009年山东分离株SDAU09E2遗传亲缘性最近，结合抗体检测结果确定分离株CAU1501为A亚群ALV。本试验结果可为后续北京地区鸽群AL的防控和净化提供参考依据。
2023年10期 v.59 65-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 1925K] [下载次数：226 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：29 ] - 韩瑞;郝成武;马长宾;张锐;凌晨;贺笋;
为探究新疆维吾尔自治区北疆3个奶牛养殖场和2个肉牛养殖场中犊牛死亡的原因，本试验采集有肺炎症状死亡牛的肺脏和有呼吸道症状牛的鼻拭子样品，进行细菌分离培养、生化鉴定、血清型和毒力基因PCR检测、药敏特性分析和小鼠毒力测定。结果显示：从20份样品中分离到4株溶血性曼氏杆菌，血清型A1型1株、A6型3株；4株分离菌株均能扩增出lktC、plpE、gs60、gcp和tbpB五种毒力基因；4株分离菌株均对恩诺沙星、氧氟沙星、呋喃唑酮、新霉素、青霉素和庆大霉素耐药，对四环素、头孢拉啶和头孢唑啉敏感。4株分离菌株对小鼠的半数致死量由低到高分别为TK-TC1株=2.7×10~7 CFU/mL、TK-YL3株=8.5×10~7 CFU/mL、TK-YL4株=5.4×10~8 CFU/mL和TK-YL7株=2.1×10~9 CFU/mL,其中TK-TC1株毒力最强。本试验可为牛场由溶血性曼氏杆菌引起的呼吸道疾病的治疗提供参考。
2023年10期 v.59 70-75页 [查看摘要][在线阅读][下载 1450K] [下载次数：420 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：27 ] - 寇茜茜;刘荣慧;张伟;史超;陈创夫;王震;张辉;
为了研究奶牛乳房炎链球菌的理化性质和耐药性，为基层科学用药提供理论依据，本试验采集新疆维吾尔自治区石河子市某奶牛养殖场患有临床型乳房炎奶牛的乳样，通过细菌分离鉴定、生化鉴定和16S rDNA基因测序确定链球菌种属，并对分离鉴定的链球菌进行药敏试验。结果显示，共分离得到3种链球菌，经生长特性、生化试验和16S rDNA基因测序确定分离菌株为无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌。药敏试验结果显示，链球菌分离株对头孢噻吩、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素和万古霉素均产生耐药性。结果表明，石河子地区奶牛乳房炎的致病菌中存在不同种链球菌，且对临床常用抗菌药具有不同程度的耐药性。本试验结果可为本地区奶牛乳房炎临床用药提供参考依据。
2023年10期 v.59 76-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 2213K] [下载次数：435 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：44 ] - 桂文龙;李巨银;魏宁;徐婷婷;
为了分析泰兴市猪源沙门菌的血清型和耐药性，为该市猪副伤寒的防控提供指导和帮助，本试验于24个规模化猪场和2个屠宰厂共采集900份猪粪样品，进行沙门菌的分离和血清型鉴定，利用纸片法检测沙门菌分离菌株对24种抗菌药物的敏感性。结果显示，从900份样品中分离出52株沙门菌，分离率为5.78%;血清型鉴定有7种，德尔卑沙门菌(36.54%)和里森沙门菌(28.85%)是优势血清型；分离菌株对多西环素(98.08%)、甲氧苄啶(90.38%)、四环素(88.46%)、氨苄西林(82.69%)和氟苯尼考(80.77%)的耐药率超过80.00%;对头孢吡肟(96.15%)、氨曲南(94.23%)和头孢曲松(92.31%)敏感率超过90.00%;有39株分离菌株具有多重耐药性。本试验初步了解了泰兴市猪源沙门菌的总体分离率和优势血清型，该地区猪源沙门菌耐药情况较为严重，尤其是四环素类药物，且大部分菌株具有多重耐药性。
2023年10期 v.59 82-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 1892K] [下载次数：189 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：33 ]