- 刘挺;孙乃岩;黄金虎;王丽平;王晓明;
为探究二甲双胍联合替加环素对TMexCD1-TOprJ1外排泵介导的替加环素耐药肺炎克雷伯菌的抗菌效果和作用机制。本试验采用棋盘肉汤法和时间杀菌曲线评价二甲双胍与替加环素联用对肺炎克雷伯菌的体外抑菌效果，并通过测定外排泵功能(罗丹明B外排试验和替加环素蓄积试验)、质子驱动力(PMF)、细胞外膜通透性和生物被膜形成能力探究二甲双胍与替加环素联合杀菌机制。结果显示，二甲双胍与替加环素联合使用对TMexCD1-TOprJ1阳性菌株的部分抑菌浓度指数(FICI)介于0.187 5～0.5,表明两者联用具有协同抗菌作用。时间杀菌曲线结果显示，与替加环素单药组相比，二甲双胍与替加环素联合用药组原菌液浓度减少2.38 log_(10)CFU/mL。罗丹明B外排试验结果显示，与对照组相比，20 mg/mL和40 mg/mL二甲双胍组的罗丹明B荧光强度极显著降低(P<0.001)。替加环素蓄积试验结果显示，与对照组相比，二甲双胍极显著提高TMexCD1-TOprJ1阳性菌株内的替加环素蓄积量(P<0.01)。PMF测定结果显示，与替加环素组相比，二甲双胍组DiSC_3(5)荧光强度极显著升高(P<0.001),即二甲双胍可破坏PMF中的膜电位差(Δψ),影响外排泵的能量来源。细胞外膜通透性测定结果显示，与对照组相比，经亚抑菌浓度二甲双胍处理的TMexCD1-TOprJ1阳性菌株的正苯基萘胺(NPN)荧光强度极显著升高(P<0.000 1),细胞外膜通透性极显著增强。生物被膜形成能力测定结果显示，与对照组相比，经二甲双胍和替加环素联合处理的TMexCD1-TOprJ1阳性菌株的生物被膜形成率(22%)极显著降低(P<0.000 1)。结果表明，二甲双胍联合替加环素对TMexCD1-TOprJ1阳性肺炎克雷伯菌具有良好的抑菌效果，并且二甲双胍可通过多种机制发挥与替加环素的协同作用。本试验可为临床治疗TMexCD1-TOprJ1阳性替加环素耐药肺炎克雷伯菌引起的感染提供策略。
2024年08期 v.60 1-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 566K] [下载次数：206 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 牛水珠;潘明;葛层层;黄思扬;
为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能，本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本，运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs19d敲除虫株，并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体外缓殖子转化试验、小鼠毒力试验和小鼠脑包囊检测试验。噬斑试验和细胞内增殖试验结果显示，与Pru虫株相比，PruΔsrs19d敲除虫株在人包皮成纤维(HFF)细胞上形成的噬斑显著变小(P<0.05),纳虫泡内形成的速殖子个数显著减少(P<0.05)。体外缓殖子转化试验发现，与Pru虫株相比，PruΔsrs19d敲除虫株的体外缓殖子转化率极显著降低(P<0.01)。小鼠毒力试验结果显示，与Pru虫株相比，弓形虫PruΔsrs19d敲除虫株不会引起ICR小鼠的死亡(P<0.05)。小鼠脑包囊检测试验结果显示，与Pru虫株相比，PruΔsrs19d敲除虫株感染小鼠后形成的脑包囊数量极显著减少(P<0.01)。本试验成功构建了弓形虫PruΔsrs19d敲除虫株，发现srs19d基因在弓形虫的体外生长、复制、毒力和慢性感染中发挥重要作用，为进一步探究SRS19D的功能和作用机制提供参考。
2024年08期 v.60 10-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 435K] [下载次数：328 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 宋晨;苏建国;郝普国;顾珂瑞;王琪;徐文琦;樊宏亮;赵红霞;
为了确定内蒙古自治区羊腹泻大肠杆菌的耐药机制，本试验采用PCR方法检测呼和浩特市周边牧场分离菌株中整合酶基因(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型)、耐药基因盒和编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的携带情况。结果显示，108株羊腹泻大肠杆菌中，Ⅰ型整合酶基因和耐药基因盒插入区扩增呈阳性的菌株为42株，检出率为38.9%,未检出Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因；菌株中有5类基因盒流行，主要携带甲氧苄氨嘧啶(dfr)和氨基糖苷类(aadA)耐药基因；分离菌株的bla_(TEM)基因检出数为83株，占比76.9%,bla_(SHV)和bla_(CTX)基因PCR扩增均为阴性；质粒DNA上成功扩增出携带bla_(TEM)型ESBLs基因的Ⅰ型整合子阳性菌株40株。结果表明，内蒙古自治区羊腹泻大肠杆菌Ⅰ型整合子的携带率较高，菌株对磺胺类、甲氧苄氨嘧啶和氨基糖苷类药物的耐受性与其携带的耐药基因盒密切相关，分离菌株中ESBLs的产生和传播由菌株自身质粒所介导，这可能是其对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要原因，且Ⅰ型整合子在ESBLs阳性菌株中的广泛分布，也使得菌株携带的耐药基因更易散播。本试验通过对羊腹泻大肠杆菌耐药性的产生和传播进行分析，以指导临床合理用药。
2024年08期 v.60 18-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 黎波宏;黄馨;何庆元;方友桥;满婷婷;陈建材;周华波;韦祖樟;欧阳康;黄伟坚;陈樱;
为了解引起广西地区犬和猫腹泻等肠道病原的分布情况，并探究犬和猫新型肠道病毒感染的临床特征，为临床中及早诊治和防控肠道疾病提供参考依据，本试验采集宠物犬和猫粪便拭子样品394份(犬样品172份，猫样品222份),并通过聚合酶链式反应(PCR)或反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)筛查犬细小病毒(CPV)、猫瘟病毒(FPV)和查帕马细小病毒(ChPV)等13种主要犬和猫肠道病毒，并分析肠道病毒阳性率与年龄、性别、免疫状况和临床症状之间的相关性。结果显示，犬粪便样品中总阳性样品数为49份，占比28.49%;其中CPV的阳性率最高，达到15.12%,临床症状为典型的肠道症状；其次，犬粪便样品中还检测到犬冠状病毒(CCoV,4.65%)、猫杯状病毒(FCV,4.07%)、嵴病毒(KoV,4.07%)、博卡病毒(BoV,3.49%)、犬瘟热病毒(CDV,2.91%)和布法病毒(BuV,0.58%);其中11份粪便样品混合感染了2种及以上种类的肠道病毒，CPV感染占10份。幼龄犬对CCoV和FCV比较易感；各肠道病毒阳性率与性别无相关性，部分肠道病毒阳性率与免疫状况和临床症状有相关性。猫粪便样品中总阳性样品数为32份，占比14.41%;FPV的阳性率最高，达到8.11%;其次，猫粪便样品中还检测到新型肠道病毒，包括FCV(4.05%)、ChPV(1.35%)、BoV(1.35%)、BuV(0.45%)和猫冠状病毒(FCoV,0.45%);其中混合感染样品仅4份，而FCV感染占3份。FPV和BoV阳性率与猫的年龄和免疫状况存在相关性，各肠道病毒阳性率与猫的性别和临床症状无明显相关性。值得关注的是，犬和猫粪便中均可检测到A型流感病毒(IAV),阳性率分别为2.91%和0.45%。综上表明，CPV和FPV仍是引起犬和猫肠道疾病的主要病原，同时也是混合感染的重要组成；多种新型肠道病毒的阳性率虽然不高，但仍是引起肠道或肠外疾病中不可忽视的病原；IAV的检出再次强调了犬和猫作为“中间宿主”的重要作用。本试验结果不仅为犬和猫肠道传染病的防控提供预警，也为切断宠物-人IAV传播提供重要参考。
2024年08期 v.60 24-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 郑晓霞;何小华;李欣;关永霞;魏盛;张岱州;陈凯;
为比较小鼠经直肠给予或自由饮用葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液后诱发溃疡性结肠炎的成模情况，本试验选取30只雄性C57BL/6J小鼠，随机分为正常对照组(WT组)、3%DSS自由饮用组(3%DSS组)和6 g/(kg·bw)DSS直肠给药组[6 g/(kg·bw)DSS组],每组10只，连续造模7 d。每天称重计算体重增长率，并进行小鼠疾病活动指数(DAI)评分。造模第8天解剖小鼠，分离结肠，测量结肠长度，H.E.染色观察组织病理学变化并进行组织病理学评分，免疫组织化学观察结肠上皮组织黏蛋白-2(MUC2)的表达并计算组织化学评分(H-score),分离脾脏并称重，计算脾脏指数。结果显示，与WT组比较，DSS造模组小鼠的体重和结肠上皮组织MUC2的H-score极显著下降(P<0.01);DAI评分、病理学评分和脾脏指数极显著升高(P<0.01),结肠长度极显著缩短(P<0.01);与3%DSS组比较，6 g/(kg·bw)DSS组小鼠的体重和结肠上皮组织MUC2的H-score显著下降(P<0.05),DAI评分和脾脏指数显著升高(P<0.05),病理学评分极显著升高(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.05)。结果表明，小鼠自由饮用3%DSS和直肠给予6 g/(kg·bw)的DSS溶液均可建立溃疡性结肠炎模型，其中6 g/(kg·bw)DSS造模症状较重、均一性较好且DSS用量较少。
2024年08期 v.60 32-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 718K] [下载次数：737 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杨柳;牟豪;吕林丹;胡霞;许国洋;郑华;张邑帆;沈克飞;
为了检测经颈部肌肉注射入猪体的、表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(ORF2)的重组T7噬菌体(T7-ORF2)在体内的存留情况，本试验将PCV2抗原和抗体均为阴性的20日龄仔猪随机分为试验组和对照组，每组5只；试验组猪只以1.5mL/只剂量颈部肌肉注射增殖收获的T7-ORF2,对照组猪只以相同途径注射等体积的洗脱液；于注射前1 d、注射后10 h、1～7 d测量体温，观察猪只的临床症状和死亡情况；分别于注射后1 h、3 h、5 h、10 h、1 d、3 d、5 d和7 d采集猪只的血液和粪便样品，注射后10 h、1 d、3 d、5 d和7 d采集肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结样品；将收集的各样品处理上清与宿主菌(大肠埃希菌BLT5403株)混合培养，通过细菌裂解分析T7-ORF2的感染性；以细菌裂解液提取的基因组DNA为模板进行PCR,检测ORF2基因；通过免疫组织化学检测T7-ORF2在肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结中的分布和存留时间。结果显示，试验组猪只在试验期体温、采食、饮水和精神状态正常，无不良症状和死亡发生；注射后5 d能从血清和粪便中检测到感染性的T7-ORF2;注射后3 d能从肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结中检测到感染性的T7-ORF2;从细菌裂解液中可扩增检测到PCV2 ORF2基因片段；免疫组织化学切片观察结果显示，T7-ORF2在机体中逐渐被清除，在脾脏中存留至少5 d,在肝脏和腹股沟淋巴结中存留至少7 d。结果表明，T7-ORF2可进入猪只的血液循环、肝脏、脾脏和腹股沟淋巴结中，并随粪便排出体外。本试验为利用T7-ORF2深入开发PCV2新型疫苗提供数据支撑。
2024年08期 v.60 38-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 398K] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 华文静;张涵;李琪瑶;钟忻桐;董文龙;
为了筛选出对奶牛乳房炎主要病原菌具有抑菌活性的细菌素，并对其生物学特性进行分析。本试验采用涂布和平板划线方法从吉林市传统辣白菜中分离纯化乳酸菌，并以金黄色葡萄球菌为指示菌通过琼脂扩散法进行抑菌试验，同时结合排酸和排过氧化氢试验初步筛选出拮抗菌株。通过菌株形态学特征和16S rRNA序列分析鉴定拮抗菌株。测定菌株生长和抑菌动力学曲线确定最佳发酵时间。采用蛋白酶敏感性、热稳定性和酸碱稳定性试验测定抗菌活性物质的理化特性，并测定其抑菌谱。结果显示，本试验分离出1株可产细菌素的拮抗菌株MX1,经鉴定其为植物乳杆菌，最佳发酵时间为22 h; MX1菌株分泌的细菌素具有良好的热稳定性和酸稳定性，经高温处理2 h或处于pH为3.0和4.0等酸性较强的环境下仍能保持较强的抗菌活性；MX1菌株分泌的细菌素对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌具有良好的抗菌活性。结果表明，本试验筛选获得的细菌素有望作为替抗产品用于细菌性奶牛乳房炎的防治。
2024年08期 v.60 44-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K] [下载次数：214 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 彭成成;木拉提·米尼尔;葛瑜涵;张新月;陆文韬;沈凯迪;曹杰;马翀;
为探究哺乳期发生腹泻和肺炎对荷斯坦奶牛寿命和后续生产性能的影响，本试验以国内某规模化牧场2012—2022年荷斯坦奶牛离群记录为基础，根据哺乳期疾病记录将奶牛分为H组(健康组)、D组(腹泻组)、P组(肺炎组)和D+P组(腹泻+肺炎组)。原始数据清洗后，使用方差分析法比较哺乳期疾病对奶牛存活日龄、首次参配日龄、首次产犊月龄和头胎305 d产奶量的影响。使用Kaplan-Meier法分析各组奶牛生存概率，Cox比例风险回归模型分析各组奶牛400日龄内离群风险。结果显示，与H组相比，D组、P组和D+P组奶牛存活日龄和生存概率极显著降低(P<0.01),400日龄内离群风险极显著增加(P<0.01),首次参配日龄、首次产犊月龄和头胎305 d产奶量均无显著差异(P>0.05)。结果表明，哺乳期腹泻和肺炎对奶牛寿命造成负面影响，对繁殖性能和泌乳性能无负面影响。
2024年08期 v.60 49-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 许明清;汪建华;马芹;刘丹丹;张中波;赵杰;石艳红;唐代萍;王胜;郭明;胡峰;于可响;李玉峰;
为探究导致山东省某肉种鸡场种鸡出现腿病的病原并进行致病性分析，本试验从该肉种鸡场收集病料，进行鸡胚分离、细胞传代、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、序列分析、商品肉鸡的致病性试验和免疫攻毒保护试验。结果显示，分离获得1株鸡呼肠孤病毒(ARV),命名为ARV-LL-2020,该病毒对鸡胚的致死率为100%,在鸡肝癌细胞系(LMH)上具有较强的适应性。ARV-LL-2020毒株与经典的S1133疫苗株同属基因Ⅰ型，但两者的主要抗原σC基因的核苷酸同源性为73.6%,氨基酸同源性为59.1%。ARV-LL-2020毒株回归商品肉鸡能复制出与实际生产中完全一致的发病症状。S1133株商品化弱毒活疫苗对ARV-LL-2020毒株的保护率仅有50%。结果表明，导致种鸡腿病的ARV-LL-2020毒株是1株ARV基因I型变异株，目前S1133株商品化弱毒活疫苗无法对其提供完全保护。
2024年08期 v.60 54-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 998K] [下载次数：263 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘淑华;王岚;张家浩;杨睿智;刘祥杰;李虎;邢潇月;李莲瑞;
新疆维吾尔自治区阿克苏地区某规模化猪场猪只发生急性死亡，临床症状为关节炎和败血症等。为了解引起猪发病的致病菌及其耐药性，本试验通过实验室常规纯培养方法对采集自该猪场的病猪脏器进行细菌的分离纯化；通过革兰染色镜检和电子显微镜观察进行形态学鉴定，生化试验进行生化鉴定，并进行16S rDNA基因PCR扩增和序列分析；通过药敏试验检测分离菌株的耐药性。结果显示，分离菌株为革兰阳性菌，形态为长直、微弯曲状；生化鉴定结果显示，触酶反应、尿素、氧化酶和吲哚呈阴性，乳糖、果糖、硫化氢和葡萄糖呈阳性；结合16S rDNA基因序列比对确定分离菌株为猪丹毒丝菌。药敏试验结果显示，分离菌株对β-内酰胺类、硝基呋喃类、磺胺类和2种氨基糖苷类药物敏感。本试验结果为该规模化猪场治疗和防控猪丹毒以及进一步研究提供了科学依据。
2024年08期 v.60 62-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 310K] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 邹明昊;马弘财;王冰艺;樊世杰;吴庆侠;曾江勇;
为了解西藏拉萨地区牦牛源表皮葡萄球菌的携带情况，本试验随机采集了26份拉萨地区牦牛鼻拭子样品，采用细菌分离纯化和形态学鉴定、生化鉴定以及16S rDNA测序和同源性比对分析对分离菌株进行鉴定；选取19种常用抗生素，利用K-B药敏纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验；检测四环素类耐药基因tet(M)和tet(K),林可胺类、氯霉素类、截短侧耳素类、恶唑烷酮类、链阳霉素A类多药耐药基因cfr,β-内酰胺类耐药基因mecA和酰胺醇类耐药基因fexA五种耐药基因，研究分离菌株的耐药性；进行攻毒试验，检测分离菌株的致病性。结果显示，分离得到1株表皮葡萄球菌，命名为LZ-1;LZ-1对氨苄西林、青霉素和红霉素耐药，对多黏菌素B、头孢他啶和克林霉素中介，对头孢曲松、四环素和新霉素等13种抗生素敏感；共检测出tet(M)、tet(K)和mecA三种耐药基因；该菌株对小鼠致病性不强。结果表明，本试验分离出1株牦牛源表皮葡萄球菌，有一定的耐药性，可为其防治提供一定的参考。
2024年08期 v.60 69-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K] [下载次数：292 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈秀琴;邱阳元;郑敏;林甦;江斌;王劭;黄梅清;
为鉴定从黑龙江省扶余市麦穗鱼腹腔内收集的绦虫裂头蚴的种类，本试验采用PCR方法分别对其核糖体内转录间隔区(ITS)和线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因进行扩增和序列测定。运用DNASTAR软件的MegAlign程序分析核苷酸同源性，采用邻接法构建基于ITS和COⅠ基因序列的系统进化树，以此分析分离虫株种内与种间的系统发育关系。结果显示，各分离虫株的ITS1和ITS2基因与舌状绦虫(AY121751)的核苷酸序列同源性最高，分别为98.8%～100%和99.6%～99.7%;各分离虫株的COⅠ基因与肠舌状绦虫(EU241273)的核苷酸序列同源性最高，为91.2%～94.7%。基于ITS序列构建的系统进化树显示，舌状绦虫和双线绦虫的ITS序列具有高度的保守性，ITS区域可能不适宜作为区分舌状绦虫属内部种类的可靠分子标记。基于COⅠ基因构建的系统进化树显示，分离虫株与土耳其、俄罗斯和欧洲的肠舌状绦虫分离株进化关系最近。根据序列同源性和COⅠ基因进化树结果，初步将本试验所分离虫株鉴定为肠舌状绦虫。结果表明，COⅠ基因更适合于舌状绦虫属种类的鉴别。本试验为舌状绦虫的分子流行病学调查提供了参考。
2024年08期 v.60 74-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 663K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 罗成江;侯轩;李俊;黄娟;吕伟军;葛孟昀;陈洁;
为了建立高效液相色谱法测定饲用酸化剂苯甲酸中邻苯二甲酸、2-羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、2-甲基苯甲酸、3-甲基苯甲酸和4-甲基苯甲酸共7种邻苯二甲酸类杂质的方法。本试验将酸化剂样品溶于甲醇和初始流动相的混合溶液中，采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5.0μm)分离7种邻苯二甲酸类杂质，以水-乙腈-甲基磺酸(85-15-0.1)和乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.2 mL/min,采用二极管阵列检测器(DAD),采集波长范围为210～400 nm,记录扫描光谱图和235 nm波长处的色谱图。用外标法定量邻苯二甲酸类杂质的含量。结果显示，7种邻苯二甲酸类杂质的浓度在0.10～40.00μg/mL范围内的线性良好，平均加标回收率在98.5%～102.7%范围内，相对标准偏差(RSD,n=5)介于0.3%～1.5%,检测限和定量限均为4 mg/kg。本试验建立的酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测方法快速且准确，可用于苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的定性和定量检测。
2024年08期 v.60 81-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 514K] [下载次数：91 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]