- 姚弈舟;刘思齐;祁英吉;朱德康;程安春;刘马峰;
鸭疫里氏杆菌（RA）可感染多种禽类，其部分临床分离株具有多重耐药性且耐药基因可经自然转化在菌间传播，但不同的RA临床分离株自然转化频率有无差异，以及菌株生长特性和耐药谱差异与其自然转化频率是否相关尚不明确。本试验针对42株RA临床分离株，以ton B1up-cfx A-ton B1down基因片段（携带抗性基因的DNA片段）为底物DNA，检测其自然转化频率；测定菌液不同生长时间的OD_(600 nm)值以绘制生长曲线；测定5大类10种抗菌药对42株RA临床分离株的最小抑菌浓度（MIC）值，并探究自然转化频率与生长特性和耐药谱之间的关联。结果显示，42株RA临床分离株中自然转化频率最高达（9.78±3.6）×10~(-5)，最低则低于检测限（<10~(-9)）；生长曲线测定结果显示，RA临床分离株14 h生长曲线最高OD_(600 nm)值为5.2±0.3，最低为3.1±0.5;RA临床分离株中88.10%(37/42）具多重耐药性，单菌株最高耐7种药物，耐5种以上药物的菌株占比23.81%(10/42），耐4种以上药物的菌株占比40.48%(17/42）。深入分析可知，自然转化频率与生长特性和耐药谱均无显著相关性（r_(pearson)均小于0.8）。本试验为探究RA耐药谱的增加与自然转化频率之间的关联性提供了数据支撑。
2025年05期 v.61 1-9页 [查看摘要][在线阅读][下载 2571K] [下载次数：220 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：42 ] - 侯静;崔琛彬;吴静;卢麒;刘世龙;张贝贝;邱月琴;王丽;蒋宗勇;杨雪芬;
为了探讨葡醛内酯（GLU）对猪繁殖与呼吸综合征病毒-呕吐毒素（PRRSV-DON）联合诱导仔猪肠道健康的影响，本试验取30头21日龄断奶仔猪，随机分为对照组（饲喂基础日粮）、DON组（饲喂含有2 mg/kg DON的基础日粮）和DON+GLU组（饲喂含有2 mg/kg DON和200 mg/kg GLU的基础日粮）。所有仔猪从第1天开始饲喂相应的日粮，第15天注射2.0 m L PRRSV(10~5 TCID_(50)/m L）。攻毒后每天记录仔猪粪便评分并计算平均腹泻率；攻毒3周后对所有仔猪进行取样，采用指示剂法测定仔猪营养物质表观消化率；通过苏木精-伊红（H.E.）染色法观察仔猪肠道形态结构并进行病理学评分；利用蛋白质印迹（Western Blot）技术检测仔猪肠道黏膜中闭锁小带蛋白-1(ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）和闭锁蛋白-1(Claudin-1）表达量；采用实时荧光定量PCR(q PCR）技术检测仔猪肠道黏膜中白细胞介素-1β(IL-1β）、白细胞介素-6(IL-6）、白细胞介素-8(IL-8）、肿瘤坏死因子α(TNF-α）、ZO-1、Occludin和Claudin-1的m RNA相对表达量；运用细菌16S r DNA高通量测序技术分析仔猪粪便微生物多样性。结果显示，在PRRSV感染后，与对照组相比较，DON组仔猪平均腹泻率显著升高（P<0.05）；粗脂肪和能量表观消化率显著降低（P<0.05）；肠道损伤严重，空肠和回肠病理学评分显著升高（P<0.05），绒毛高度与隐窝深度比值（V/C）显著降低（P<0.05）；空肠Occludin和Claudin-1的m RNA表达量显著降低（P<0.05）；空肠ZO-1、Occludin和回肠ZO-1、Occludin、Claudin-1的蛋白表达量显著降低（P<0.05）；空肠IL-1β、TNF-α和回肠IL-8、TNF-α的m RNA表达量显著升高（P<0.05）；粪便微生物的Chao1、Shannon和Simpson指数均显著降低（P<0.05）。与DON组相比较，DON+GLU组仔猪平均腹泻率有下降趋势（P>0.05）；粗脂肪和能量表观消化率显著升高（P<0.05）；肠道轻度损伤，空肠和回肠病理学评分显著降低（P<0.05),V/C显著增加（P<0.05）；空肠和回肠ZO-1、Occludin的m RNA表达量显著升高（P<0.05）；空肠和回肠Occludin的蛋白表达量显著升高（P<0.05）；空肠IL-8、TNF-α和回肠IL-1β、IL-6、IL-8的m RNA表达量显著降低（P<0.05）；粪便微生物的Chao1、Shannon和Simpson指数均显著升高（P<0.05）。结果表明，饲粮中添加GLU可以缓解PRRSV-DON联合诱导引起的仔猪肠道屏障损伤、炎症和肠道微生物多样性紊乱，表明GLU可作为新型营养调控手段来应对PRRSV-DON协同作用，为GLU应用于仔猪养殖提供理论依据。
2025年05期 v.61 10-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 3039K] [下载次数：133 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ] - 马尧丹;俞晖;陈海恩;杨阳开心;葛书君;吴江;康恺;
为探究猪瘟病毒（CSFV）感染对猪睾丸支持细胞（ST）mRNA表达谱的影响，本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型，通过蛋白免疫印迹试验（WB）和间接免疫荧光（IIF）染色检测CSFV E2蛋白的表达；构建4个cDNA文库进行转录组测序，对差异表达基因（DEGs）进行基因本体论（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）富集分析并筛选血睾屏障相关DEGs，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）、WB和IIF对DEGs进行验证。结果显示，CSFV感染24和48 h后，ST细胞均表达了E2蛋白；与Control 24 h相比，CSFV 24 h的ST细胞共鉴定出86个显著差异DEGs(P <0.05)；与Control 48 h相比，CSFV 48 h的ST细胞共鉴定出1 481个显著差异DEGs(P <0.05)。DEGs极显著富集在27个GO功能条目上，主要包括生物学过程、细胞组分和分子功能（P <0.01）；极显著富集的KEGG信号通路主要包括肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、晚期糖基化终产物受体（AGE-RAGE）信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等（P <0.01）。DEGs的qPCR验证结果显示，与Control 24 h相比，CSFV 24 h的CLDN11、H2AFX和CDH2表达量极其或极显著上调（P<0.001或P <0.01）,TJP1、OCLN和GJA1表达量显著下调（P <0.05）；与Control48 h相比，CSFV 48 h的FASLG、TGFB1、IL-6和H2AFX表达量极其或极显著上调（P <0.001或P <0.01）,TJP1、OCLN、GJA1、CLDN11和CDH2表达量极显著下调（P <0.01）。差异表达蛋白WB验证结果显示，与Control 24 h相比，CSFV 24 h的TJP1、CLDN11和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调（P <0.001或P <0.01）,CLDN11蛋白表达量极其显著上调（P <0.001）；与Control 48 h相比，CSFV 48 h的TJP1、CLDN11、OCLN和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调（P <0.001或P <0.01）。IIF结果显示，与Control 48 h相比，CSFV 48 h的TJP1蛋白相对荧光面积极显著下调（P <0.01）,CLDN11、OCLN和GJA1蛋白相对荧光面积显著下调（P <0.05）。以上验证结果与转录组测序结果基本一致。结果表明，CSFV感染24和48 h均会影响ST细胞屏障功能相关基因的表达，本试验为进一步探究CSFV对ST细胞屏障的影响机制提供了数据支持。
2025年05期 v.61 22-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 2063K] [下载次数：122 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：19 ] - 赵婵娟;鄢行安;曹立亭;
在动物疫病防控中，定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市，对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）和戊型肝炎病毒（HEV）进行调查和分析。在2022—2024年每年3—5月，从西南地区10个区县的47家规模化猪场的健康仔猪群中采集了5 349份全血样本和4 275份鼻拭子样本，通过聚合酶链式反应（PCR）对所有样本进行了PRRSV、PRV、CSFV和HEV检测。结果显示，PRRSV、PRV和CSFV在西南地区已得到有效控制。2022年、2023年和2024年，西南地区临床健康猪群中经典PRRSV(C-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.22%(4/1 811)、0.27%(5/1 831)和0(0/1 707)，高致病性PRRSV(HP-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0.16%(3/1 831)和0.18%(3/1 707);PRV的阳性率分别为0.07%(1/1 505)、0.19%(3/1 541)和0(0/1 229);CSFV的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0(0/1 831)和0(0/1 707)。然而，HEV的阳性率呈上升趋势，从2022年的0.11%(2/1 811)、2023年的0.44%(8/1 831)增加到2024年的1.23%(21/1 707)。结果表明，西南地区的规模化猪场已经实现了对PRRSV、PRV和CSFV的有效预防和净化；但在生猪流动性较大的区域，仍能零星监测到相关病毒。与此同时，快速上升的HEV阳性率应引起规模化猪场管理者的高度关注，对HEV的监测和防控需进一步加强。
2025年05期 v.61 33-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 1659K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：20 ] - 刘丹;李慧彤;张博源;高建帅;蒋卉;范学政;张广智;郜卫华;丁家波;熊涛;沈青春;
为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒（PPRV）核酸检测质控品，本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白（CP）和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR，经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装甲RNA质控品，并对其进行电子显微镜观察、定量、耐核酸酶检验、均匀性和稳定性检验，以评估其作为标准物质的可能性。结果显示，p ET-CPA-PPR经诱导表达和纯化后形成直径为23～28 nm、大小均一、已包封PPRV检测靶标基因N的装甲RNA颗粒，浓度为2.24×10~(9 )copies/μL，可以有效抵抗核酸酶降解作用，均匀性良好且在（37±1）℃条件下可稳定保存至少30 d。结果表明，基于MS2噬菌体制备的PPRV装甲RNA拷贝数高，均匀性和稳定性良好，能够为PPRV核酸检测提供安全可靠的标准化参考物质。
2025年05期 v.61 43-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 2180K] [下载次数：114 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ] - 王海杰;张跃伟;解长占;吴浩;王爽;谷月;李金祥;吴文学;
为了解我国牛肠道病毒（BEV）流行现状，为其防控提供理论依据，本试验从四川省成都市某牛场的腹泻病牛粪便样本中分离得到1株病毒，将其命名为SC-726并进行后续研究。将SC-726接种牛肾细胞（MDBK）后观察细胞病变效应（CPE），计算病毒含量，使用透射电子显微镜观察该病毒的形态特征，分析其理化特性、核酸型和细胞嗜性，绘制一步生长曲线，最后对该分离株进行5′非翻译区（5′UTR）基因测序以分析其遗传演化。结果显示，SC-726分离株感染MDBK细胞后，细胞发生明显的CPE；病毒最高滴度为1×10~(6.2) TCID_(50)/0.1 m L；电镜下观察到直径约30 nm的无囊膜球形粒子，符合传统小RNA病毒形态学特征；理化特性鉴定结果显示，该分离株几乎不受有机溶剂（乙醚、氯仿）和胰蛋白酶的影响，同时具有一系列与BEV相符的特征，如耐酸、不耐强碱、热敏感；DNA抑制剂阿糖胞苷（Ara-C）对该病毒滴度无影响，判定为RNA病毒；SC-726株能够在MDBK、乳仓鼠肾细胞（BHK-21）、猪肾细胞（PK-15）、非洲绿猴胚胎肾细胞（Marc-145）和犬肾细胞（MDCK）等多种动物细胞上增殖；遗传进化分析结果显示，该分离株为F型牛肠道病毒（BEV-F）。本试验从腹泻牛粪便样本中成功分离出1株BEV-F，进一步丰富了我国BEV资料库，为该病毒病的防治提供了理论依据。
2025年05期 v.61 52-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 1563K] [下载次数：275 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：11 ] - 静争;金红岩;王春艳;王文杰;沈佳宇;范志坚;侯绍华;
为了快速、便捷、准确诊断猫疱疹病毒1型（FHV-1）和猫杯状病毒（FCV），本试验选取FHV-1的糖蛋白C(GC）基因（Gen Bank登录号：OR504662）和FCV的衣壳蛋白1(VP1）基因（Gen Bank登录号：OP904215）以及一段猫外源性内标序列设计并合成引物和探针，构建重组阳性质粒标准品p MD19-T-G、p MD19-T-P和p MD19-T-C，建立了双重Taq Man实时荧光定量PCR方法。以重组阳性质粒标准品绘制标准曲线，验证该方法的特异性、灵敏性和重复性，利用建立的方法检测33份临床样本评估该方法的可行性，并对泰州市292份流浪猫眼口鼻分泌物样本进行检测。结果显示，本试验建立的双重Taq Man实时荧光定量PCR方法具有良好的线性关系，对其他病原无交叉反应，对FHV-1和FCV的最低检测限均为1×10~1copies/μL，组内和组间的变异系数均小于2%；对33份临床样本的检测结果显示，FHV-1和FCV的阳性符合率为100%,FHV-1总符合率为93.9%,FCV总符合率为90.9%;292份流浪猫眼口鼻分泌物样本中，FHV-1阳性率为20.9%,FCV阳性率为46.2%,FHV-1和FCV混合阳性率为12.0%。结果表明，本试验建立的双重Taq Man实时荧光定量PCR，特异性强、灵敏度高、重复性好，为临床猫呼吸系统疾病病原鉴别诊断和宠物健康监测提供了技术支持。
2025年05期 v.61 58-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 1518K] [下载次数：167 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ] - 李炎夫;贾晓晴;马梅清;杜山;焦万明;马园;郝陆瑶;张艳妮;李倩楠;郭志凯;丁玉林;陆静;王瑞;
为探索驱虫药耐药性产生的机制，本试验对捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）的第3期幼虫（L3）以伊维菌素、阿苯达唑和左旋咪唑药物进行处理，采用数据非依赖性采集（DIA）蛋白质组测序技术对捻转血矛线虫L3经药物作用前后的蛋白质进行差异表达分析，以筛选表达差异的多药耐药性相关蛋白质。结果显示，共鉴定出1 888个差异表达蛋白质，其中63个与多药耐药性相关；进一步的深入分析揭示，有36个蛋白质的表达差异显著（P <0.05），而25个是捻转血矛线虫特有的、与耐药性相关的差异表达蛋白质。基因本体论（GO）分析结果显示，共有60个差异表达耐药性蛋白质被归类于生物学领域的76个分支中；京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析结果显示，有46个表达水平不同的蛋白质富集到脂质代谢和内分泌系统等75条信号通路中。综合分析发现，有5个捻转血矛线虫特有的耐药性蛋白质表达水平差异显著，分别为含有UDP-葡萄糖醛基转移酶结构域的部分蛋白质、抗原H11、免疫球蛋白v组和i组、含有酪氨酸蛋白激酶（PTK）结构域的蛋白质及含有致命巨幼虫同源结构域2的蛋白质，这些蛋白质均参与重要的生物学过程和关键代谢通路。本试验所获结果为揭示差异表达蛋白质与捻转血矛线虫脂类代谢、内分泌系统和多药耐药性的关系提供了基础数据，对探明捻转血矛线虫多药耐药性产生的机制具有重要意义。
2025年05期 v.61 65-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 2695K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 陈国庆;邓梦梦;谢等龙;程阳颖;张燕;齐雪佳;李世杰;曹兴元;
为了评估新研制的莫昔克丁浇泼剂在猪体内的药代动力学及其绝对生物利用度，本试验建立高效液相色谱法（HPLC）测定猪血浆中的莫昔克丁含量，并对该方法的特异性、线性范围、检测限、定量限、准确度、精密度和稳定性进行验证。将24头2.5月龄三元杂交猪随机分为A、B、C三组，每组8头，A组以1.25 mg/（kg·bw）剂量单次静脉注射100 mg/m L的莫昔克丁溶液，B组和C组分别以1.25和2.50 mg/（kg·bw）剂量单次浇泼给药莫昔克丁浇泼剂，经HPLC检测，绘制血药浓度-时间曲线图，计算药代动力学参数和绝对生物利用度。结果显示，本试验建立的猪血浆莫昔克丁含量测定方法特异性良好，在0.5～500 ng/m L范围内线性关系良好，检测限为0.4 ng/m L，定量限为0.5 ng/m L，准确度、精密度和稳定性良好。动物试验结果显示，C组猪只给药后全部时间点的血药浓度均极显著高于B组（P<0.001),C组猪只血浆中莫昔克丁的最大浓度[C_(max),(7.50±1.26)ng/m L]和药-时曲线下面积[AUC_(last),(72.50±26.55)ng·day/m L]均极显著高于B组[C_(max)(1.12±0.15)ng/m L、AUC_(last)(13.21±2.23)ng·day/m L](P<0.001），消除半衰期[T_(1/2),(8.11±1.30)d]极显著低于B组[（15.79±4.15)d](P<0.001），平均滞留时间[MRT,(9.31±1.27)d]显著低于B组[（13.13±3.03)d](P<0.05），达到C_(max)的时间点[T_(max),(1.72±2.05)d]低于B组[（2.94±1.45)d]，但差异不显著（P>0.05);A组猪只AUC_(last)极显著高于B组（P<0.001),T_(1/2)显著低于B组（P<0.05）；试验猪只给予1.25和2.50 mg/（kg·bw）剂量的莫昔克丁浇泼剂后，绝对生物利用度分别为3.11%和8.53%。结果表明，莫昔克丁浇泼剂可经皮肤快速吸收，缓慢消除，本试验结果可为后期确定莫昔克丁浇泼剂用于驱杀猪体内外寄生虫时的合适给药剂量提供参考。
2025年05期 v.61 73-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 1254K] [下载次数：184 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ]