中国兽医杂志-暂未开通

2019, v.55(12) 27-30

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及初步应用
Development and Application of a Droplet Digital Polymerase Chain Reaction Method for Absolute Quantification Detection of Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

王林;孙丹;韦海涛;宋彦军;周德刚;高晓龙;梅力;冯小宇;

摘要(Abstract):

根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构蛋白(NSP2)基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成NSP2特异性的引物和TaqMan探针,建立了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR, ddPCR)检测方法。结果显示,ddPCR最佳反应的引物和探针浓度分别为900 nM和250 nM;特异性和重复性检测结果表明,ddPCR具有良好的特异性和较高的重复性;灵敏度检测结果表明,ddPCR的检测灵敏度比荧光定量PCR高10倍;ddPCR的检测结果与标准品拷贝数的相关系数为R~2=0.999 1,表明该方法检测结果具有良好的线性关系和可信度;用建立好的ddPCR方法对10份临床样品的高致病性PRRSV进行了拷贝数定量。

关键词(KeyWords): 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒;微滴式数字PCR;绝对定量

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 北京市农业局农业科技项目(20160127);; 北京市科技重大专项课题(Z171100001317013)

作者(Author): 王林;孙丹;韦海涛;宋彦军;周德刚;高晓龙;梅力;冯小宇;

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